NKT细胞在小鼠胚胎着床期母胎免疫耐受中作用的初步研究

摘要

目的:
　　 探究着床前后母体子宫蜕膜内T淋巴细胞的变化；通过刺激NKT细胞的增殖活化,检测其分泌的细胞因子变化,分析其在母体子宫内膜免疫微环境中的调节作用,以探明NKT细胞活化与胚胎着床的关系。
　　 方法:
　　 1、用免疫组化法观察T细胞在围着床期小鼠子宫组织中的定位；
　　 2、用淋巴细胞分离液分离小鼠外周血单核淋巴细胞；
　　 3、通过腹腔注射不同浓度的抗原α-GalCer刺激NKT细胞活化,用RT-PCR法半定量检测NKT细胞活化后外周血单核细胞和子宫蜕膜组织中的IL-4,IFN-Y分泌的变化；
　　 结果:
　　 1、免疫组化结果显示在妊娠D1、D2、D3、D4天小鼠子宫内膜仅有少量CD3在T细胞膜上表达；妊娠D5天小鼠子宫内膜CD3表达量明显增多,并且达到高峰；妊娠D6天小鼠子宫内膜CD3表达量下降；
　　 2、腹腔注射不同浓度(0、10.3、20.6、41.2ug/ml)的抗原α-GalCer组中,用RT-PCR技术检测不同组别外周血单核淋巴细胞和子宫蜕膜中IFN-γ的mRNA的表达。结果显示实验组各组中IFN-γ的mRNA表达明显低于空白对照组,差异有显著性(P<0.05)；而不同浓度药物的实验组间IFN-γ的mRNA表达量差异无显著性(P>0.05)；
　　 3、腹腔注射不同浓度(0、10.3、20.6、41.2ug/ml)的抗原α-GalCer组中,用RT-PCR技术检测不同组别外周血单核淋巴细胞和子宫蜕膜中IL-4的mRNA的表达。结果显示在外周血单核淋巴细胞,实验组各组中IL-4的mRNA表达明显低于空白对照组,差异有显著性(P<0.05)；不同浓度药物的实验组间IL-4的mRNA表达量差异无显著性(P>0.05)。而在子宫内膜,剂量为20.6ug/ml组IL-4的mRNA表达较其他组明显升高,差异有显著性(P<0.05)；其他各组间无显著性差异(P>0.05)；
　　 4、通过分析外周血单核细胞和子宫内膜IFN-γ/IL-4的相对光密度比值,结果显示在外周血中10.3ug/ml、41.2ug/ml组IFN-γ/IL-4较空白组和20.6ug/ml组明显降低(P<0.05),20.6ug/ml组与空白组相比,差异无显著性(P>0.05)。而在子宫内膜,10.3ug/ml、20.6ug/ml组IFN-γ/IL-4与空白组相比,明显减少,差异有显著性(P<0.05)；41.2ug/ml组IFN-γ/IL-4与空白组相比,差异无显著性(P>0.05)。
　　 结论:
　　 1、CD3 T细胞在小鼠胚胎植入母体过程中增多,提示CD3 T细胞可能参与胚胎着床免疫微环境的调节；
　　 2、着床期子宫内膜中活化的NKT细胞可能通过产生更多的IL-4使子宫蜕膜局部免疫反应朝体液免疫应答方向调节；
　　 3、着床期外周活化的NKT细胞使外周单核细胞中IFN-γ/IL-4向Th1漂移,而子宫内膜中活化的NKT细胞使IFN-γ/IL-4的比值向Th2漂移,有利于局部子宫内膜形成免疫耐受微环境。