乳腺癌细胞Id1 miRNA真核表达载体构建转染及对MMP9的影响

摘要

[目的]：构建Id1 miRNA真核表达载体，并成功转染乳腺癌MDA-MB-231细胞株，筛选稳定表达的乳腺癌细胞株，观察对乳腺癌细胞的对Id1、MMP9表达的影响。 [方法]： 利用Invitrogen公司网上BLOCK-iT miR RNAi设计工具，设计针对Id1基因(ID:3397)的两个转录版本mRNA(NM_002165.2和NM_181353.1)都有效的干扰序列。将干扰序列插入pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR表达载体，构建Id1miRNA真核表达载体，通过脂质体转染法转染到乳腺癌MDA-MB-231细胞株，以杀稻瘟霉素筛选稳定表达的细胞株。经RT-PCR方法鉴定其对Id1、MMP9表达的影响。 [结果]： 成功构建Id1 miRNA真核表达载体，经电泳及测序鉴定正确，转染乳腺癌MDA-MB-231细胞系。经过2W杀稻瘟霉素筛选，获得稳定表达的细胞系。经RT-PCR方法鉴定，结果表明转染Id1 miRNA真核表达载体的乳腺癌MDA-MB-231细胞株其Id1、MMP9表达水平低于对照组，且Id1、MMP9表达水平正相关。未转染组与阴性对照转染组无明显差异。 [结论]： 本实验成功构建Id1 miRNA真核表达载体，并成功转染乳腺癌MDA-MB231细胞株，筛选出稳定表达Id1 miRNA的乳腺癌细胞株，证实干扰有效，并且Id1与mmp9表达相关，为将来进一步研究他们之间的生物学行为差异，或详细了解其分子作用机制奠定了基础。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略词表

声明

前 言

第一部分：Id1及MMP 9在MDA-MB-231乳腺癌细胞株中的表达检测

1材料与方法

2结果

3讨论

第二部分Id1 miRNA真核表达载体的构建

1材料与方法

2结果

3讨论

第三部分Id1稳定表达细胞株的筛选及Id1与MMP9表达关系研究

1材料与方法

2结果

讨 论

小结

参考文献

致谢

综述：Id1与乳腺癌的研究进展