L-肉碱的提取检测及减肥抗疲劳功能的研究

摘要

本文采取三种不同溶剂(水、高氯酸、盐酸)提取不同品种肉(羊肉、牛肉、猪肉、鸡肉)的L-肉碱,并用酶法和高效液相色谱法对采用不同提取方法及不同品种肉(羊肉、猪肉、牛肉、鸡肉)中的L-肉碱含量进行比较,得出结论:1、高效液相法不易受样品中其它物质的影响,且比酶法更简便、快速、准确的检测出肉中L-肉碱的含量;2、羊肉中的肉碱在四种肉中含量较高,高氯酸的提取效果在三种溶剂中是最好的,考虑到实用性问题,用盐酸作为提取溶剂,也能得到较好的提取效果.动物实验用昆明种小鼠,使其口服L-肉碱溶液剂量为10mg/g.d、30mg/g.d(Ⅱ,Ⅳ组分别喂养10mg/g.d、30mg/g.d的化学合成的L-肉碱,Ⅲ组喂养10mg/g.d羊肉提取的L-肉碱),采用组间对照的方法:1、测定小鼠的体重和游泳时间,数据显示,小鼠体重明显下降(P<0.01),游泳时间显著延长(P<0.01);2、试剂盒测定血清总胆固醇、甘油三酯、乳酸、尿素氮生理生化指标,真空冷冻干燥测定肌肉水分,高效液相法测定小鼠腿部肌肉L-肉碱含量,实验结果表明,与对照组相比,L-肉碱对小鼠的生长发育没有不良影响,却能显著降低体内总胆固醇、甘油三酯的含量(P<0.01),摄入L-肉碱的小鼠组血清尿素氮、乳酸含量远远低于对照组(P<0.01);3、高效液相色谱法显示,各组小鼠的体内L-肉碱的含量与游泳时间成正比;实验结果还显示,减肥、抗疲劳效果:服用30mg/g.d小鼠组的效果并不比服用1 0mg/g.d小鼠组强;化学合成肉碱不如天然提取的L-肉碱对小鼠效果好.再取三组昆明种小鼠做交叉实验,口服L-肉碱剂量为10mg/g.d,一组为对照组,另两组喂L-肉碱(Ⅱ组羊肉提取的L-肉碱,Ⅲ组化学合成的L-肉碱),一段时间后,交换喂养.实验结果证明,L-肉碱的作用没有持续性.此外,同上面方法,测生理生化指标,肌肉水分含量,L-肉碱含量,结果证明L-肉碱效果的不持续性.最后,提取小鼠腿部肌肉中的脂肪,甲酯化,用气相色谱-质谱法分析各个脂肪酸片断,验证L-肉碱帮助运输长链脂肪酸进入线粒体氧化的作用.

目录

文摘

英文文摘

1.前言

1.1肥胖与疲劳

1.1.1肥胖的起因与脂肪酸的消耗

1.1.2疲劳的起因与运动过程中的能量消耗

1.1.3肥胖、疲劳与健康饮食

1.2肉碱的化学结构及生物学特性

1.3 L-肉碱的生理功能及应用

1.3.1促进线粒体长链脂肪酸的氧化及应用

1.3.2抗疲劳作用及应用

1.4 L-肉碱的检测方法

1.5本文的研究目的和内容

1.5.1研究现状和意义

1.5.2研究内容

1.5.3本研究的创新点

2.材料与方法

2.1实验原料

2.2主要仪器

2.3主要试剂

2.4实验方法

2.4.1 L-肉碱标准样的酶法检测

2.4.2 L-肉碱的高效液相色谱检测

2.4.3两种检测方法进行比较

2.4.4不同样品L-肉碱的提取与检测

2.4.5动物实验检测L-肉碱的功能性

2.4.6交叉实验

2.4.7数据分析

3.结果与讨论

3.1酶法测定(DTNB法)

3.1.1酶法测定L-肉碱的可行性

3.1.2标准曲线的绘制

3.1.3不同样品中L-肉碱检测

3.2肉碱的高效液相测定(HPLC法)

3.2.1不同肉中L-肉碱含量的比较

3.3动物实验测试

3.3.1减肥测试

3.3.2抗疲劳测试

3.3.3小鼠的其它指标测定

3.4交叉实验

3.4.1减肥测试

3.4.2抗疲劳测试

3.4.3小鼠的其它指标测定

3.5小鼠体内L-肉碱含量的测定

3.6交叉实验中L-肉碱含量的测定

3.7气相色谱-质谱法联用测定小鼠体内脂肪酸片断

4.结论

4.1 L-肉碱的提取及酶法检测

4.2动物实验

5.展望

6.致谢

参考文献

研究生期间发表论文