抑癌基因p53对HELF细胞周期调控作用的研究

摘要

p53是重要的抑癌基因，在细胞周期调控中发挥关键作用，多数癌症中均发现p53基冈表达异常。本研究用野生型p53(pcDNA3-wtp53)质粒和179位残基突变的突变型p53(pcDNA3-mtp53)质粒转染HELF细胞，研究了p53基因在HELF细胞周期调控中的作用。 实验结果表明野生型p53基因表达的上调使HELF细胞周期阻滞于G1期，细胞体积减小，并下调cyclin A、cyclin E、Cdk2和Cdk4的表达，同时上调p21的表达。而突变型p53基因表达的上调则促进细胞周期从G1期到s期的转换，同时使细胞体积增大，上调cyclin A和Cdk4的表达。本研究证明p53基因的179位残基突变对于HELF细胞cyclin A和Cdk4的表达有诱导作用，并可能借此促进细胞周期进程。 mdm2是调控p53基因表达的重要因子，在细胞中形成mdm2/p53负反馈调节环，精细调节p53在细胞中的表达水平。为了探讨HELF细胞中mdm2/p53反馈调节对于细胞周期的作用，本研究分别用pcDNA3-mdm2质粒和psilencer-mdm2质粒转染HELF细胞，研究转染后细胞中p53基因的表达变化，以及转染对于细胞生长和周期的影响。 实验结果表明mdm2质粒的转染抑制HELF细胞p53基因的表达，对细胞周期和生长表现出一定的促进作用，并且与突变型p53基因表现出相互协同的作用。而psilencer-mdm2质粒干扰细胞mdm2表达后，促进p53基因表达，但对细胞周期和生长没有明显的影响。结果表明mdm2表达的增强可能会通过抑制p53基因表达来促进细胞生长，并且mdm2与突变型p53基因的作用存在相互联系。而mdm2表达受干扰后，细胞中可能还有其它调节p53表达和细胞生长的机制发挥作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略语

声明

第一章绪论

1文献综述

2研究目的与意义

第二章材料与方法

1材料

2方法

第三章结果与分析

1质粒鉴定结果

2细胞总RNA和蛋白检测

3 p53基因表达的变化

4 p53基因对细胞周期和体积的作用

5 p53基因对细胞周期相关基因表达的作用

6 mdm2基因表达的变化

7 mdm2对p53基因表达和细胞周期的作用

第四章.讨论

1 p53基因对细胞周期的作用

2 p53基因对细胞周期相关基因表达的作用

3 p53基因对细胞体积的作用

4 mdm2对p53基因表达以及细胞周期的作用

5小结

第五章结论与建议

1结论

2建议

参考文献

致谢