油松花粉多糖分离纯化及抗氧化活性研究

摘要

油松花粉多糖具有抗肿瘤、增强免疫等功能。课题以华北承德地区的油松花粉为原料，对其中的花粉活性多糖的提取工艺进行研究；苯酚-硫酸法测定花粉多糖含量的显色条件进行优化；采用DEAE-纤维素52柱层析、Sephacryl S-200凝胶柱层析对花粉多糖进行分离和纯化；运用Sephacryl S-300凝胶柱层析进行纯度鉴定；运用红外光谱分析、紫外扫描分析对花粉多糖的结构进行初步研究；通过体外清除超氧阴离子自由基和羟基自由基研究油松花粉多糖的抗氧化活性。主要的研究结果如下：
　　 (1)以葡萄糖为对照，优选苯酚-硫酸法测定油松花粉多糖含量的显色条件。最佳显色条件为：取待测油松花粉多糖2mL，加入浓度为5％苯酚1mL，迅速滴加浓硫酸6.0mL，.摇匀后于沸水浴中放置10min，在483nm处测定吸光度值。
　　 (2)对油松花粉的水提工艺进行了研究，探讨提取温度、提取时间、料液比和提取次数对多糖提取率的影响。在单因素实验的基础上，通过正交试验确定最佳提取工艺条件。结果表明浸提温度对多糖提取率的影响最大，其次为料液比、提取次数，浸提时间的影响最小。油松花粉多糖的最佳提取工艺条件为：提取温度为70℃，料液比为1:12，提取时间为2h，提取次数为3次。在此提取条件下，松花粉多糖的得率为1.81％。
　　 (3)用DEAE-纤维素52对油松花粉精制多糖进行初步分离，主要得到D1和D3两个组分。再用Sephaeryl S-200凝胶柱色谱分别对多糖D1和D3进一步分离纯化得到两种均一组分D11和D31。经过Sephaeryl S-300凝胶柱色谱进行纯度鉴定，表明D11和D31是均一多糖。采用用凝胶过滤法测定D11分子量为76468。UV检测显示油松花粉多糖D11于280nm处未见有核酸和蛋白特征吸收峰，经IR检测证实多糖D11具有多糖类物质的特征吸收峰。
　　 (4)油松花粉多糖粗多糖、精制多糖对O2-·自由基和·OH自由基均有一定的清除作用，并且随着多糖浓度的增大清除效果增强。油松花粉精制多糖的作用效果大于油松花粉粗多糖。