呋喃唑酮及其代谢物酶联免疫检测方法的研究

摘要

本论文对呋喃唑酮及其代谢物3-氨基-2-恶唑烷酮(AOZ)兽药残留的酶联免疫检测方法进行了的研究。合成了针对呋喃哗酮原药和代谢物的衍生物3-(2-硝基苯亚甲基)-氨基-2-恶唑烷酮(NPAOZ)均具有高度类似性的半抗原3-[(4-羧基苯基)-甲基]氨基-2-恶唑烷酮(CPAOZ)，用活性酯法和混合酸酐法连接蛋白作为免疫原，比较其免疫效果。
　　 在间接酶联免疫检测方法中，异源包被原是将呋喃唑酮原药的硝基还原成氨基后用戊二醛法连接蛋白OVA获得。由活性酯法连接的免疫原得到的血清对NPAOZ和呋喃唑酮均表现了良好的亲和力，IC50分别为2.5μg/L和2.0μg/L，出限(IC15)分别为0.25μg/L和0.09μg/L。在直接酶联免疫竞争优化中，抗体表现出更低的检出限，IC15分别为0.02μg/L和0.05μg/L，相应的IC50分别为2.1μg/L和2.8μg/L。抗体展现了良好的特异性，与其他的硝基呋喃原药、相应代谢物、结构类似物均无交叉反应。
　　 由于在体内易分解的呋喃唑酮经常被不合法的应用于动物养殖过程中，导致具有致癌、致突变性的代谢物AOZ残留，本实验选取了动物饲料和动物组织分别作为呋喃唑酮和其代谢物AOZ研究对象，包括：鸡饲料、猪肉、猪肝、猪肾、鸡肉、鸡肝、虾。检测方法较之前的方法灵敏性更高，方法在三个不同的添加浓度1，5，20μg/kg，鸡饲料、猪肉、猪肝、猪肾、鸡肉、鸡肝、虾的回收率在76％-109％之间，相对标准偏差4.7％-11％之间。
　　 通过高效液相色谱检测方法，对建立的呋喃唑酮及其代谢物AOZ的直接竞争酶联免疫检测方法的准确性进行了验证。两种方法检测结果的一致性很高，线性相关系数R2值在0.99以上，表明所建立的检测呋喃唑酮及其代谢物AOZ的酶联免疫方法是准确、有效、可信的，并非常适用于饲料中呋喃唑酮及动物性食品中呋喃唑酮代谢物AOZ的定性及定量检测。