外周血DD3mRNA定量检测在前列腺癌诊断和治疗监测中初步应用

摘要

目的 采用Taqman-MGB探针技术，建立荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)检测DD3mRNA的方法，并对外周血DD3mRNA定量检测在前列腺癌诊断和治疗监测中临床应用进行评价。 方法 1．根据Genebank的DD3mRNA序列，在DD3基因的外显子1和3之间设计一对引物和一条Taqman-MGB探针，优化反应体系，建立DD3mRNA的FQ-RT-PCR方法。 2．用pBluescriptIISK载体与普通PCR扩增所得的DD3cDNA片段进行连接，制备重组质粒进而转化感受态细胞DH5α并进行克隆构建重组质粒作为标准品。 3．对本方法进行方法学评价，包括探针稳定性、灵敏度、特异度和精密度等。 4．用荧光定量RT-PCR方法对35例未治疗前列腺癌、58例内分泌治疗后前列腺癌、59例良性前列腺增生患者和10例健康男性志愿者外周血DD3mRNA含量进行定量检测，并对DD3mRNA诊断及疗效监测价值进行评价。 结果 1．成功建立了荧光定量逆转录聚合酶链反应检测DD3mRNA的方法，本方法检测灵敏度为6拷贝／反应，线性范围为6～6×108拷贝，Ct值与拷贝数之间具有良好的线性关系(R2=0．994)，批内、批间变异系数分别为1．25-2．06％和2．32-3．59％。扩增产物克隆和测序分析显示本扩增片段为DD3序列的特异性片段。 2．未治疗前列腺癌组外周血DD3mRNA含量明显高于治疗后前列腺癌组、前列腺增生组和健康男性志愿者组，差异具有统计学意义(P<0．01)。前列腺增生组和健康男性志愿者组外周血DD3mRNA含量间差异无统计学意义(P=0．432)。未治疗前列腺癌患者随着临床分期增加，外周血DD3mRNA含量也增高，差异具有统计学意义(P<0．01)。 3．当临．界值为846copies／mi时，DD3mRNA曲线下面积为0．822(95％．CI：0．725．0．919)，灵敏度、特异度分别为74．3％、89．8％。4．外周血DD3mRNA可以反映前列腺癌患者对内分泌治疗的效果。 结论 建立了荧光实时定量逆转录聚合酶链反应检测DD3mRNA的方法，本方法具有敏感性高、特异性强、重复性和稳定性好、定量准确、高效、结果数据化等特点。外周血DD3mRNA定量检测是前列腺癌诊断的良好指标，也是内分泌治疗过程疗效监测的指标。

目录

引言

材料与方法

结果

分析与讨论

小结

展望

参考文献

附录

个人资料：

致谢

综述 DD3基因与前列腺癌

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