二倍体马铃薯原生质体培养与体细胞融合技术研究

摘要

本试验对一批从CIP引进马铃薯材料进行倍性鉴定，研究倍性鉴定过程中材料与预处理对染色的影响；以筛选出的二倍体马铃薯叶肉细胞为原生质体游离材料，研究二倍体马铃薯原生质体培养的基本条件和影响因素以及体细胞融合参数对融合频率的影响等。研究结果表明：
　　（1）在进行马铃薯倍性鉴定时，取材是关键，由块茎发根所得的根尖其分裂细胞明显多于试管苗的根尖，且染色体清晰可见染色效果好；预处理以0.1％秋水仙碱处理5～8h效果最佳；染色剂中卡宝品红较醋酸洋红的着色深，分色明显；在鉴定的60份材料中，二倍体材料10份，三倍体材料7份，四倍体材料43份。
　　（2）原生质体游离时针对不同材料所需的渗透压不同，实验所用的三种基因型的渗透压分别是Ⅲ-5为0.35～0.40M， JK3是0.35M，Ⅱ-10为0.30～0.45M；不同的酶液组合对原生质体的产量有很大的影响，当纤维素酶为0.8%，果胶酶为0.4%时，原生质体产量最高，酶解最充分；实验采用愈伤组织和叶肉细胞分别进行游离，两者的活性不存在差异，但产量叶肉细胞明显高于愈伤组织；预处理能够提高原生质体的产量和活性；不同基因型的马铃薯叶肉细胞分离得到的原生质体在产量、活性及细胞大小上都存在差异；不同激素组合对愈伤组织分化也存在很大的影响。
　　（3）化学诱导融合时，当采用的融合剂为PEG6000，所用浓度为30%时，诱导的融合率最高；电融合中成串电压和时间是决定原生质体成串、膜接触的关键参数，当排列电压为100v/cm，作用时间为30s时，成串率达到最大值；当直流脉冲电压为1000v/cm，作用时间为100μs，脉冲次数为1次时，双核融合率最高；化学融合和电融合在融合频率上的差异不大，均在35%以上，但在愈伤形成时间及分化时间上，由电融合得到的细胞都较 PEG融合早，且愈伤的分化频率大于PEG融合；不同基因型组合的融合细胞培养存在很大的差异，由Ⅲ-5+JK3组合融合培养得到的细胞分裂快，愈伤组织形成早，分化快，并得到了植株；而Ⅲ-5＋Ⅱ-10组合细胞分裂相对迟一些，但由化学融合培养的细胞只形成愈伤，未能得到植株。JK3＋Ⅱ-10组合只进行了电融合，但在培养初期细胞大部分就沉入培养皿底部褐化死亡。

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前言

第一章 文献综述

1. 1有关染色体倍性

1.2 原生质体游离与培养

1.3 细胞融合

第二章 马铃薯资源倍性鉴定

2.1材料与方法

2.2结果与分析

2.3讨论

第三章 马铃薯原生质体游离与培养

3.1材料与方法

3.2结果与分析

3.3 讨论

第四章 马铃薯体细胞融合技术研究

4.1材料与方法

4.2结果与分析

4.3 讨论

结论

1 马铃薯资源的倍性鉴定

2 马铃薯原生质体游离与培养

3 马铃薯体细胞融合研究

图版说明

参考文献

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