链霉菌TD-1产挥发性物质抑制番茄灰霉病菌的研究

摘要

本室从饲料厂附近土壤中，分离筛选出一株具有广谱抑菌活性的链霉菌菌株TD-1，该菌株主要通过产生的次级代谢产物对指示菌起抑菌作用，其中对灰霉孢菌具有较强的抑制作用。链霉菌TD-1产生的次级代谢物包括挥发性物质和非挥发性物质。论文对TD-1菌株代谢产生的挥发性抑菌物质进行了初步研究。主要研究结果如下:
　　(1)采用单因素和正交试验对链霉菌TD-1产挥发性抑菌物质的麦麸培养条件进行优化，结果为:料水比1∶1，发酵时间8d，瓶装量8％，接种量20％。挥发性抑菌物质在优化后的实验条件下比初始条件下对灰霉孢菌的抑菌率提高了1.81倍。
　　(2)研究了链霉菌TD-1产生的挥发性物质对离体条件下灰霉孢菌的抑菌机理。结果表明，挥发性物质能抑制灰霉孢菌的产孢能力、菌丝生长和孢子萌发，使菌丝形态异常、表面粗糙，并破坏菌体细胞膜、线粒体膜结构完整性，使细胞内蛋白质、核酸类、还原糖和蛋白质等物质泄露。
　　(3)研究了链霉菌TD-1菌剂的制备条件，结果发现，固体菌剂用烘箱干燥，乳化剂添加量为司盘60∶吐温80(1∶1)，在4℃条件下进行保存，得到的抑菌活性最大。另外，实体实验表明，链霉菌TD-1代谢产生的挥发性气体在一定程度上能降低番茄灰霉病菌的生存能力和侵染性。
　　(4)通过GC/MS研究了不同培养时间链霉菌菌株TD-1产生的挥发性化合物的种类及变化规律。结果表明，在不同培养时间内链霉菌TD-1产生的挥发性物质种类几乎相同，但相对含量变化较大，主要种类有醛类、萜类、酚类、烯烃类、芳香烃类和烷烃类等化合物。链霉菌TD-1在麦麸物培养基上产生的挥发性物质从培养4d开始大量产生，在8d时对灰霉孢菌的抑菌作用达到最大，产生的物质也最多，达到63种，其中2-甲基异冰片和顺-1，4-二甲基金刚烷相对含量较大，但其抑菌活性还需进一步验证。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 番茄灰霉病的危害及防治

1．1．1 番茄灰霉病简介

1．1．2 番茄灰霉病的危害现状

1．1．3 番茄灰霉病的防治现状

1．2 挥发性物质及其抑菌作用

1．2．1 化学熏蒸剂

1．2．2 生物熏蒸剂

1．3 挥发性物质在果蔬保鲜中的应用

1．4 挥发性物质的收集和检测

1．4．1 挥发性物质的收集

1．4．2 挥发性物质的检测

1．5 本论文的研究目的、意义和内容

1．5．1 论文研究目的、意义

1．5．2 研究内容

2 材料与方法

2．1 实验材料

2．1．1 供试菌株

2．1．2 培养基及培养条件

2．1．3 主要试剂

2．1．4 主要仪器

2．2 实验方法

2．2．1 挥发性物质抑菌活性的测定

2．2．2 固体菌剂活菌量的测定

2．2．3 挥发性物质对番茄灰霉病菌的抑制作用

2．2．4 挥发性物质培养条件优化

2．2．5 链霉菌TD-1产挥发性物质麦麸培养条件正交试验

2．2．6 挥发性物质对灰霉病菌的抑制研究

2．2．7 链霉菌TD-1制剂的研究

2．2．8 链霉菌TD-1产挥发气体对番茄果实上灰霉病菌的防治作用

2．2．9 挥发性物质的GC／MS分析鉴定

2．2．10 数据统计与分析

3 结果与讨论

3．1 挥发性物质对灰霉病菌的抑制

3．2 链霉菌TD-1产挥发性物质培养条件优化

3．2．1 接种量对灰霉病菌抑菌率的影响

3．2．2 料水比对灰霉病菌抑菌率的影响

3．2．3 瓶装量对抑菌率的影响

3．2．4 培养时间对抑菌率的影响

3．3 链霉菌TD-1产挥发性物质麦麸培养条件正交试验

3．4 挥发性物质抑制灰霉病菌的研究

3．4．1 挥发性物质对灰霉孢菌产孢能力的影响

3．4．2 挥发性物质对灰霉孢菌孢子萌发的影响

3．4．3 挥发性物质对灰霉孢菌核酸泄漏情况的影响

3．4．4 挥发性物质对灰霉孢菌细胞膜丙二醛含量的影响

3．4．5 挥发性物质对灰霉孢菌线粒体膜电位的影响

3．4．6 挥发性物质对灰霉孢菌还原糖含量的影响

3．4．7 挥发性物质对灰霉孢菌蛋白质含量的影响

3．4．8 挥发性物质对灰霉病菌菌丝形态的影响

3．5 链霉菌TD-1菌剂的制备

3．5．1 固态发酵物干燥方法的研究

3．5．2 对乳化剂的筛选

3．5．3 保存温度的筛选

3．6 链霉菌TD-1产生的挥发性物质的对番茄灰霉病菌的防治作用

3．7 挥发性物质的GC／MS分析鉴定

4 结论

5 展望

参考文献

致谢