芹菜籽蛋白的提取及其降血脂功效的评价

摘要

本文以芹菜籽为原料，首先通过碱溶酸沉法提取芹菜籽蛋白，采用单因素和正交实验进行工艺优化，得到最大提取率;确定芹菜籽蛋白的分子量，并将其分成分子量不同的片段，研究不同分子量的芹菜籽蛋白与胆酸盐结合能力的差异。采用液态发酵法将芹菜籽进行处理得到多肽。通过对多肽和蛋白胆酸盐结合能力、表面特性以及内部结构的探究，表明经发酵处理，芹菜籽蛋白分子量降低，表观形态以及内部结构都发生了变化，导致其降血脂活性增强，达到本实验的目的。 芹菜籽蛋白提取率达最大时的工艺参数:pH11，料液比1∶40，提取温度60℃，提取时间60min。影响提取效果因素排序为PH＞料液比＞提取温度＞提取时间。 测定所提取蛋白的功能特性并通SDS-PAGE分析芹菜籽蛋白的分子量。超滤法将芹菜籽蛋白分离成分子量不同的5种组分，CSP1(MW＞25kDa)、CSP2(20kDa＜MW＜25kDa)、CSP3(10kDa＜MW＜20kDa)、CSP4(6kDa＜MW＜10kDa)和CSP5(MW＜6kDa)。整体来看，潜在的降血脂能力随着分子量的降低而升高，分子量最小的组分CSP5表现出最强的胆酸盐结合能力，平均值达到0.705μmol/mg。 为更高效的降低芹菜籽蛋白的分子量，以枯草芽孢杆菌HYT-151-1为发酵菌种处理芹菜籽生产多肽，确定最佳发酵参数为:接种量12％、温度37℃、发酵时间2d，按照影响芹菜籽多肽转化率程度从大到小排序为:发酵时间、温度、接种量。 通过胆酸盐结合实验发现，发酵得到的芹菜籽多肽对三种胆酸盐的结合能力均强于蛋白。同时发酵法明显降低了芹菜籽蛋白分子量，使其转化成更加容易被人体消化吸收的小分子多肽，这与前期分子量越小对胆酸盐结合效果越好的实验结果相一致。 取芹菜籽蛋白和发酵多肽进行电镜观察，发现其微观形态存在明显差异。蛋白颗粒大小不均一，表面组织紧密，而多肽颗粒体积小，表面疏松，比表面积较大，从而暴露更多活性位点;FTIR研究其二级结构，可知多肽的构象组成发生变化，无序性增强。同时氨基酸分析，多肽含有氨基酸的种类和质量都明显增多。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1芹菜籽研究概况

1．1．1芹菜简介

1．1．2芹菜籽简介

1．1．3芹菜籽营养成分与药理功效

1．1．4芹菜籽研究现状

1．2植物蛋白的研究概述

1．2．1植物蛋白营养功能

1．2．2植物蛋白研究现状

1．3植物源活性肽的研究概述

1．3．1植物源活性肽的分类和生理功能

1．3．2植物源活性肽研究现状

1．4．1高血脂

1．4．2天然降血脂活性成分

1．4．3胆酸盐研究进展

1．5本论文研究的背景及内容

1．5．1研究背景

1．5．2研究目的及内容

2材料与方法

2．1实验材料

2．2实验主要试剂

2．3实验主要仪器

2．4实验方法

2．4．1芹菜籽基本成分的测定

2．4．2芹菜籽蛋白提取工艺

2．4．3芹菜籽蛋白基本特性的测定

2．4．4 SDS-PAGE法测定芹菜籽蛋白的分子量

2．4．5芹菜籽蛋白的初步分离以及各组分对胆酸盐的吸附情况对比

2．4．6超声辅助发酵法制备芹菜籽多肽工艺研究

2．4．7芹菜籽蛋白和发酵多肽对胆酸盐的结合能力对比

2．4．9芹菜籽蛋白以及多肽电镜分析(SEM)

2．4．10芹菜籽蛋白和多肽傅里叶红外光谱分析

2．4．11芹菜籽蛋白和发酵多肽游离氨基酸分析

3结果与讨论

3．2．2芹菜籽蛋白等电点的确定

3．2．3超声辅助提取蛋白单因素实验

3．2．4超声辅助提取芹菜籽蛋白正交实验

3．3芹菜籽蛋白特性研究

3．3．1芹菜籽蛋白样态

3．3．2芹菜籽蛋白功能特性测定结果

3．4芹菜籽蛋白SDS-PAGE测定结果

3．5．1不同分子量芹菜籽蛋白初步分离

3．5．2不同分子量芹菜籽蛋白对胆酸盐的结合情况

3．6．1枯草芽孢杆菌生长曲线

3．6．2发酵法制备芹菜籽多肽工艺优化

3．7芹菜籽蛋白以及多肽对胆酸盐结合情况

3．8芹菜籽蛋白以及多肽的电泳结果

3．9芹菜籽蛋白以及多肽的微观结构观察(SEM)

3．10芹菜籽蛋白以及多肽二级结构

3．11芹菜籽蛋白以及发酵产物的氨基酸分析

4结论

4．1全文总结

4．2论文创新点

4．3论文的不足之处

5 展望

参考文献

7攻读硕士学位期间发表论文情况

致谢