银杏保健品中银杏酸的质谱与色谱法快速分析研究

摘要

银杏是我国特有的传统植物，富含银杏黄酮和萜内酯等多种生物活性成分，具有很高的食、药用价值，已被开发成各种保健品如银杏茶、白果粉饮品等。本论文的研究对象为银杏的主要毒性成分之一银杏酸，具致敏性、细胞毒性和致突变毒性。欧盟和《中国药典》分别规定银杏叶提取物中银杏酸含量不得超过5mg/kg和10mg/kg，现行标准中虽未对银杏保健品中的银杏酸含量作出规定，但其摄入量不宜过多。为实现大批量银杏保健品中银杏酸的快速筛查和准确定量，本论文开发了质谱和色谱法用于银杏饮品中银杏酸的分析测定，具体研究成果总结如下:
　　一、建立了实时直接分析-质谱法(Direct Analysis in Real Time-Mass Spectrometry,DART-MS)对白果饮品中的银杏酸进行快速定性以及半定量分析的方法。研究影响离子化效率的因素，确定负离子模式、氦气作为离子化气体、样品移动速度0.2mm/s、气体温度450℃为最优条件，并进行了方法学考察。该方法在2-50mg/L浓度范围内线性良好，线性相关系数达0.9981，检出限为0.5mg/L，RSD在12.5％-13.7％(n=6)之间，方法回收率为63.8％-71.2％。以GA13∶0为外标，对银杏叶、白果种仁、白果粉饮品中的银杏酸进行半定量分析并辅以二级质谱定性，测得3种样品中总银杏酸含量分别为4799.4±545.3mg/kg，67.4±10.9mg/kg和26.6±2.3mg/kg。将该法和热辅助在线衍生化-气相色谱法的方法学参数、定量结果进行比较，误差在合理范围内，说明DART-MS法适用于银杏酸的快速测定和半定量分析。凭借其快速、实时、前处理步骤少等优点，在大批量银杏保健品中银杏酸的快速筛查、定性以及半定量分析上显示出强大的优势。
　　一、建立了热辅助在线衍生化-气相色谱法(Thermochemolysis-Gas Chromatography,TMC-GC)，用于银杏保健品中银杏酸的快速、准确定量。采用甲醇对样品粉末中的银杏酸进行萃取富集，萃取液与三甲基氢氧化硫(Trimethylsulfonium Hydroxide，TMSH)以1∶2的比例在裂解炉300℃的高温辅助下瞬间生成银杏酸甲酯，由GC-FID(MS)分离测定，极大地提高了分析灵敏度。结果表明，银杏酸GA13∶0在5-600mg/L浓度范围内线性良好，线性相关系数达0.9994，检出限为1.8mg/L(S/N=3)，RSD为2.4％-2.6％(n=6)。以GA13∶0为外标，分别测定白果种仁、白果粉饮品、银杏叶、银杏秋茶和春茶样品中的7种银杏酸，总含量在31.5mg/kg-1.89×104mg/kg之间。同时，测定了银杏秋茶和春茶中银杏酸在冲泡90min后的溶出率分别为16％和12％，溶出量分别为1.95mg/g和2.23mg/g。白果粉饮品加标回收率在87.1％-106.1％之间。本方法无需耗时的离线衍生化步骤，操作简便、定量准确、灵敏度高，在DART-MS法快速筛查的基础上，本法可进一步应用于大批量样品中银杏酸的准确、快速定量。
　　以上结果表明，本文开发的实时直接分析-质谱法和热辅助在线衍生化-气相色谱法适于银杏保健品中银杏酸的分析研究，结果为银杏保健品的快速筛查和质量控制提供方法参考。

目录

论文说明

声明

摘要

符号说明

第一章 绪论

1．1 引言

1．2 银杏酸的结构及性质、用途

1．3 银杏酸的分析方法

1．3．1 荧光／紫外分光光度法

1．3．2 薄层色谱法

1．3．3 核磁共振法

1．3．4 高效液相色谱法

1．3．5 气相色谱法

1．4 实时直接分析-质谱法

1．4．1 仪器构造及工作原理

1．4．2 影响离子化效率的参数

1．4．3 实时直接分析-质谱法的优点及应用

1．5 热辅助在线衍生化-气相色谱法

1．5．1 在线衍生化试剂

1．5．2 衍生化反应机理及仪器装置

1．5．3 影响衍生化效率的因素

1．5．4 在线衍生化-气相色谱法的优点及应用

1．6 本文的研究目的、意义和内容

第二章 实时直接分析-质谱法联用对银杏保健品中银杏酸的快速定性及半定量分析

2．1 引言

2．2 实验部分

2．2．1 试剂与仪器

2．2．2 实验方法

2．3 结果与讨论

2．3．1 DART-MS条件选择

2．3．2 银杏酸标准品的分析

2．3．3 方法学考察

2．3．4 实际样品测定

2．4 本章小结

第三章 热辅助在线衍生化-气相色谱法测定银杏保健品中的银杏酸

3．1 引言

3．2 实验部分

3．2．1 试剂与仪器

3．2．2 实验方法

3．3 结果与讨论

3．3．1 在线衍生化-气相色谱法条件的选择

3．3．2 银杏酸的定性分析

3．3．3 方法学考察

3．3．4 实际样品测定

3．5 本章小结

第四章 总结、创新点和展望

4．1 主要研究成果

4．2 创新点

4．3 展望

参考文献

攻读硕士学位期间发表的学术论文

致谢