食品中桔霉素的检测、降解特性及其控制技术研究

摘要

桔霉素是一种真菌的次级代谢产物，具有抑菌性，肾毒性，致癌和致畸性。因此，食品中桔霉素的含量问题已成为国内关注的焦点。目前，检测桔霉素的方法主要有液相色谱法、酶联免疫法和薄层层析法。本文研究了食品样品预处理纯化技术，桔霉素的去除和降解，及其霉菌产桔霉素能力研究和培养条件对霉菌产桔霉素的影响研究。
　　 1、食品样品经60％乙醇超声提取20min，浓缩后用A柱吸附其中的桔霉素，采用V(C溶剂)∶V(水)=80∶20(pH2.1)进行洗脱，最后用高效液相荧光检测法进行桔霉素检测。采用岛津ODS柱(HypersilODS2，5μm，250×4.6mm)，乙腈∶超纯水(pH2.5)=30∶70为流动相，检测波长为λex=331nm，λem=500nm。桔霉素在100μg/mL-0.01μg/mL的浓度范围内具有良好的线性关系(R2=1.0000)，精密度为0.074％。食品样品经上述纯化方法处理后，检出限比粗提液降低了8.5-10倍，色谱干扰峰明显变少，桔霉素得到较好的分离，食品样品桔霉素回收率在80％左右。所检测的食品中，米醋类，黄酒类，谷物类，米酒类，果汁类样品较为安全。而酱油类食品桔霉素高达3.2513μg/mL，腐乳类高达6.0301μg/g。
　　 2、高温，高含水促进桔霉素降解，碱性、酸性环境也促进桔霉素降解。盐含量在12％以内时，对桔霉素降解的影响较小，而在14％和16％的高盐含量作用下桔霉素降解率可达50％以上，降解明显。牛津杯抑菌试验中，经120℃、160℃处理的红曲粉提取液没有抑菌圈，然而140℃处理组表现出对枯草芽孢杆菌一定抑制作用。由质谱图可知，经140℃处理的桔霉素降解产物中可能含有强毒性物质桔霉素H2，而经室温光照处理的桔霉素降解产物中可能含有CitrinalA。
　　 3、从红曲粉和柑橘皮中分别分离到了一株红曲霉和一株青霉，经鉴定为安卡红曲霉和桔青霉。安卡红曲霉、桔青霉、米曲霉和黑曲霉四种霉菌中桔青霉产桔霉素能力最强，且在MSG发酵培养基上所产的桔霉素为64.21μg/mL。随着培养时间的延长，四种霉菌培养物中桔霉素的含量逐渐增加，达到一个最高点后，又缓慢减少，且菌种不同产桔霉素最适温度也不同。碱性条件有利于四种霉菌桔霉素的合成和分泌，其中米曲霉在pH为7.7时，桔霉素含量达到了最高点，其他霉菌随着pH的增加，桔霉素含量随之增加。在培养基中添加铵盐和EDTA抑制了四种霉菌产桔霉素能力，其中硫酸铵和硝酸铵对桔霉素的抑制性最强。

目录

摘要

第1章 引言

1．1 桔霉素

1．1．1 桔霉素概述

1．1．2 桔霉素的理化性质

1．1．3 桔霉素的抑菌性

1．1．4 桔霉素的毒性

1．1．5 桔霉素的稳定性

1．2 桔霉素的产生

1．2．1 红曲霉产桔霉素情况

1．2．2 青霉产桔霉素情况

1．2．3 桔霉素的合成途径

1．3 桔霉素的分布

1．4 桔霉素的检测方法的研究

1．5 桔霉素分离纯化方法的研究

1．6 本课题研究意义和研究内容

1．6．1 课题研究意义

1．6．2 课题研究内容

第2章 建立柱联高效液相色谱法检测食品中的桔霉素

2．1 实验材料、仪器与试剂

2．1．1 实验材料

2．1．2 实验仪器

2．1．3 实验试剂

2．2 实验方法与步骤

2．2．1 高效液相色谱分析方法的建立

2．2．2 桔霉素标准曲线的绘制

2．2．3 桔霉素提取溶剂的选择

2．2．4 桔霉素提取方式的选择

2．2．5 食品样品处理

2．2．6 食品样品的纯化

2．2．7 食品样品中桔霉素含量的计算方法

2．3 实验结果

2．3．1 标准曲线的绘制

2．3．2 桔霉素提取溶剂的选择

2．3．3 桔霉素提取方式的选择

2．3．4 食品的纯化方法

2．3．5 桔霉素精密度实验

2．3．6 食品样品的桔霉素含量

2．3．7 加标回收率实验

2．4 小结

第3章 影响桔霉素降解的因素及热降解产物的研究

3．1 实验材料、仪器与试剂

3．1．1 实验材料

3．1．2 实验仪器

3．1．3 实验试剂

3．1．4 培养基

3．2 实验方法与步骤

3．2．1 温度和水分对桔霉素降解的影响

3．2．2 pH对桔霉素降解的影响

3．2．3 食盐含量对桔霉素降解的影响

3．2．4 牛津杯抑菌实验

3．2．5 MS鉴定高温和常温下桔霉素降解产物

3．2．6 桔霉素降解率计算

3．3 实验结果

3．3．1 温度和水分对桔霉素降解的影响

3．3．2 pH对桔霉素降解的影响

3．3．3 食盐含量对桔霉素降解的影响

3．3．4 牛津杯抑菌实验

3．3．5 桔霉素降解产物的质谱实验

3．4 小结

第4章 霉菌鉴定和产桔霉素条件的研究

4．1 实验材料、仪器和试剂

4．1．1 实验材料

4．1．2 实验仪器

4．1．3 实验试剂

4．1．4 培养基

4．2 实验方法和步骤

4．2．1 菌种的分离鉴定

4．2．2 霉菌产桔霉素能力的测定

4．2．3 温度和时间对霉菌产桔霉素的影响

4．2．4 pH对霉菌产桔霉素的影响

4．2．5 添加物对霉菌产桔霉素的影响

4．3 实验结果

4．3．1 红曲粉中红曲霉的分离鉴定

4．3．2 柑橘中青霉菌的分离鉴定

4．3．3 霉菌产桔霉素能力测定

4．3．4 温度和时间对霉菌产桔霉素的影响

4．3．5 pH对霉菌产桔霉素的影响

4．3．6 添加物对霉菌产桔霉素的影响

4．4 小结

第5章 总结

参考文献

致谢

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