Determination of Some Angiotensin Converting Enzyme Inhibitors in Drug Formulations and Biological Fluids

摘要

本论文致力于研究建立检测七种药学上重要的血管紧张素转换酶抑制剂类药物的新的简单的分析方法，该类药物分别为盐酸贝那普利(BZL)，依那普利马来酸(ENP)，福辛普利钠(FSP)，赖诺普利(LSP)和雷米普利(RMP)和两个代谢产物卡托普利二硫化物(CPD)，依那普利拉(ENT)及氢氯噻嗪(HCT)。由于这些药物的功效显著，现在已经被大量广泛使用，本方法应用于检测该类药物在其原料和药片及在人体血浆和尿液加标后的中含量。研究讨论并解释了所提出的方法的原理及实验参数和方法步骤，并对给出的数据进行统计分析。
　　 论文包括三章:
　　 第一章
　　 该部分对所研究药物，它们的用途，副作用，化学性质，作用机制，和药理作用进行了整体概述，同时对文献中报道的它们的分析方法进行了综述。
　　 第二章
　　 该部分介绍了反相高效液相色谱法同时测定研究药物与氢氯噻嗪(HCT)的方法。该方法可替代许多已发表论文中的方法，可对药物制剂以及人体血浆和尿液样品中带或不带氢氯噻嗪的目标化合物进行分析。该方法利用一个简单的梯度程序，在11分钟的运行时间内通过使用氨水乙腈的缓冲液(pH值9)和ExtendRP-C18(颗粒大小为25μm，4.6×250mm，Agilent)HPLC色谱柱进行分离，使用紫外检测器在215nm对流出物进行检测。通过研究pH值，溶剂强度和分析时间对峰形和定量的影响对方法进行优化。本研究中所提出的方法可以对7个ACE抑制剂和药物配方中大多并发给药的氢氯噻嗪进行精确的测定，同时对人体血浆和尿液中的加标测定也达到可接受的灵敏度。该方法的根本优势在于一类重要的药物同时或作为单一分析物进行分析时的简单、方便、快速和有效的样品制备步骤，与许多已报道的方法相比，它是更实用的替代品，节约试剂、时间和精力，使其易于成为大型制药公司或医疗实验室采用的首选。文中所提出的采用简单的技术和设备对生物体液中的药物进行分析研究的适用性是一个重要的成果。如果与更灵敏的检测器，如与MS联用会有更大的进步，这会使得50ngmL-1以下的血药浓度的药代动力学研究更为方便。实验验证了该方法的专属性，回收率，准确性，精密度和线性。
　　 第三章
　　 在该部分中，建立了简单高选择性的离子色谱紫外检测法测定药物制剂和人体加标血浆中盐酸贝那普利(BZP)，依那普利拉(ENT)和赖诺普利（LSP)。ENT和LSP是疏水性很小的化合物，采用高效液相色谱法对其分析基本上是成熟。本论文提出的方法是基于这两个药物在碱性介质中离子化形式可以得到很好的保留可在草酸阴离子中溶解，通过一个简单的单步蛋白质沉淀处理过程，采用IonPacAS(l)1(颗粒大小13μm，4×250mm，Dionex)阴离子交换柱分离，在215nm处紫外检测。BZP可以在合理的时间分离，主要是由于其相对较高的疏水性,实验中亦将其加入分析体系。三种药物已成功地在加标人体血浆中得到检测，实验采用酪氨酸作为内标,回收率接近100％。同时验证了该方法的专属性，回收率，准确性,精密度和线性。此外,该方法可用于测定药物制剂中的目标药物。而且，该方法可用于研究散装形式和同期配方中的BZP的稳定性,因为它能够很好地区别完整的药物及其降解产物。该研究所提出的方法通过一个没有任何其他内源性基质成分严重干扰的非常简单的处理过程，高选择性可信地测定药物制剂和加标人体血浆中的BZP，ENT和LSP。其根本优势在于它能够提高药物的保留，简单、方便的色谱分析方法使其在复杂基质中5分钟内可得到可信的分析结果，适用于大型制药公司和医学实验室的常规分析。本研究所提出的采用简单的技术和设备对生物体液中的药物进行分析研究的适用性是一个重要的的成果。该方法可以有效地检测匹配其药代动力学血药浓度的药物浓度，使其可以替代许多已报道的方法。
　　 第四章
　　 血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂用高效液相分离时，峰形通常或多或少会受到一些影响而导致峰变形,甚至分裂。在大多数情况下，这种现象会导致定性错误和定量的误差。这是因为该药物含有脯氨酸肽键结构，会发生顺反异构变化反应。但是药物中的双键影响了肽键的旋转，使异构化反应速度要比药物分子与固定相的结合速度慢。大多数文献中都要求较高的温度和低pH值，还要加特殊的有机改性剂，添加剂或分析柱，以改善其峰形。和大多数基于反相分离模式的HPLC方法不同，本文选用的分离柱为SCS1，分离机理为阳离子交换机理。该方法允许在常温及温和的pH条件下进行分离，而且大大改善了峰型。该方法还应用于同时分析药片和人体血浆中的被测药物，得到了满意的结果。结果证明本方法省时、高效,可以应用于药物的常规分析。
　　 第五章
　　 本文提供了一种使用离子色谱非抑制电导法同时测定五种血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂（贝那普利、依那普利、依那普利拉、赖诺普利、雷米普利）的简便方法。流动相为5mMH2S04∶乙腈(62∶38v/v)。本方法应用于测定药物生成过程中的药物含量。被测药物在所测样品中的回收率为97-103％(n=6)，RSD低于3.45％(n=6)。本方法使用一台商品化的离子色谱仪，进行该类药物的常规分析，结果证明该方法可以高效的应用于该类药物的常规分析。

目录

声明

Abstract

摘要

Contents

PART ⅠGeneral Introduction

1．Introduction

1．1． Angiotensin Converting Enzyme inhibitors

1．2．Hydrochlorothiazide

1．3．Individual members：

1．4．Chemical properties

1．5．Literature Review

1．6．Objective of the Work：

References

PART Ⅱ Fast Gradient High Performance Liquid Chromatography method with UV Detection for Simultaneous Determination of Seven Angiotensin Converting Enzyme Inhibitors together with Hydrochlorothiazide in Pharmaceutical Dosage Forms and Spiked Human Plasma and Urine*

2．1．Introduction

2．1．1．High Performance Liquid Chromatography in Pharmaceutical Analysis

2．1．2．Aim of the Developed method

2．2．Experimental

2．2．1．Reagents and materials

2．2．2．Chromatographic system

2．2．3．Preparation of stock solutions，calibration standards

2．2．4．Sample preparation

2．2．5．Assay validation

2．3．Results and Discussion：

2．3．1．Development of the RP-HPLC method

2．3．2．Applications

2．3．3．Assay validation

2．4．Conclusion

References

PART Ⅲ Enhanced Selectivity Approach for Fast simultaneous Analysis of Enalaprilat，Lisinopril and Benazepril in Pharmaceutical Dosage Forms and Spiked Human Plasma by Ion Chromatography*

3．1．Introduction

3．1．1．Ion Chromatography and Pharmaceutical Industry

3．1．2．Aim of the Developed method

3．2 Experimental

3．2．1．Regents and materials

3．2．2．Preparation of drugs stock solutions，calibration standards，quality-control samples and other reagents

3．2．3．Sample preparation

3．2．4．Chromatographic system

3．2．5．Assay validation

3．3．Results and Discussion：

3．3．1．Development of the IC method

3．3．2．Applications

3．3．3．Assay validation

3．4．Conclusion

References

PART Ⅳ Elution of Angiotensin Converting Enzyme inhibitors from SCS1 Analytical column and its appfications

4．1． Introduction

4．1．1．Aim of the Developed method

4．2．Experimental

4．2．1．Regents and materials

4．2．2．Preparation of drugs stock solutions，calibration standards，quality-control samples and other reagents

4．2．3．Sample preparation

4．2．4．Chromatographic system

4．2．5．Assay validation

4．3．Results and Discussion：

4．3．1．Development of the IC method

4．3．2．Applications

4．3．3．Assay validation

4．4．Conclusion

References

PART Ⅴ Simultaneous Determination of Angiotensin Converting Enzyme Inhibitors by Cation Exchange Chromatography with Direct Conductivity Detection

5．1．Introduction

5．1．1．Aim of the Developed method

5．2．Experimental

5．2．1．Regents and materials

5．2．2．Preparation of drugs stock solutions and calibration standards

5．2．3．Sample preparation

5．2．4．Chromatographic system

5．2．5．Assay validation

5．3．Results and Discussion：

5．3．1．Development of the IC method

5．3．2．Applications

5．3．3．Assay validation

5．4．Conclusion

References

Ⅳ Thesis summary

Thesis summary

Thesis published papers

Acknowledgement