梅山与杜洛克母猪发情前期卵巢组织差异表达基因的分离研究

摘要

猪的繁殖力是影响养猪业生产效益的主要因素，对猪产仔数性状的选育和改良是猪育种工作的主要目标之一。由于猪排卵及繁殖性状是由多基因控制的数量性状且遗传力很低(h2≤0.15)，因此很难通过常规育种技术取得进一步提高。分子生物学技术在育种选择中具有常规育种技术所不可比拟的优势，但因目前影响猪排卵及繁殖性状的分子机理还不够系统、全面，这在很大程度上限制了分子生物学技术在育种选择中的应用。
　　 本研究利用DDRT-PCR的技术从基因转录水平研究发情前期梅山与杜洛克母猪卵巢之间差异表达的基因，分离差异表达基因，为深入研究影响猪排卵数的分子机理调控网络打下基础。主要研究结果如下：试验选取同一胎次发情正常繁殖表现符合品种特征的梅山猪和杜格克母猪各3头取其卵巢，提取总RNA，组成两个总RNA池。采用9条锚定引物，10条随机引物组成90种引物组合进行DDRT-PCR，共获得13条差异表达条带，通过NCBI比对发现其中5条序列与已知基因高度同源，分别命名为EST511(216bp)，EST141(495bp)，EST142（104 bp)，EST64(202bp)，EST33(244bp)。EST511与谷氨酸半胱氨酸连接酶有较强的同源性，同源性为88％。EST141与猪ADP-ribosylation factor 3（ARF3)gene高度同源，同源性为99％。EST142与猪BCL2/adenovirus E1B 19kDa interacting protein 3-like（BNIP3L)序列同源，同源性为97％。EST64与超氧化物歧化酶Orgotein（Superoxide Dismutase, SOD),有较强的同源性，同源性为99%。EST33与猪的骨形成蛋白和激活素的跨膜抑制剂高度同源，同源性为100%。其他序列在数据库中均未发现同源基因。
　　 通过半定量RT-PCR验证EST在猪种间的表达差异，并分析这些差异表达EST在梅山猪心、肝、肺、肾、肌肉、脂肪、小肠、大脑、卵巢、子宫、脾、输卵管等各个组织中的表达情况，结果表明：各个EST在两猪种卵巢间均为差异表达。EST511在肾和小肠中微量表达，在心、肝、肺和大脑中检测不到表达，在其他组织中表达。EST141在肾中中等表达，在输卵管，子宫，脾中少量表达，在心、肝、肌肉、脂肪、大脑中检测不到表达。EST142在肾、肌肉、脂肪、大脑、脾、子宫、输卵管中中等表达，在心、肝中微量表达，在肺和小肠中几乎检测不到表达。EST64在肾、子宫、大脑、脾表达丰富，在肌肉，脂肪中少量表达，在心、肝、肺、小肠、输卵管中几乎检测不到表达。EST33在肌肉中微量表达，在大脑、肾和肺中几乎检测不到表达，在其他组织中都表达。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：符号说明

声明

文献综述

2 材料和方法

3结果和分析

4讨 论

5 小结

参考文献

致 谢

自我简介