新疆阿魏菇多肽的制备及抗氧化活性研究

摘要

我国是一个食用菌生产和消费的大国,食用菌-阿魏菇作为新疆特有资源,菇体洁白,质地脆嫩,味道鲜美,营养丰富,受到人们的青睐。阿魏菇中的营养丰富全面,糖类、蛋白质、脂肪酸含量较高,其中蛋白质含量约占干菇的20％,包含18种氨基酸,8种人体必需氨基酸全部具备。并且维生素(VC、VD)、食用纤维、钙、铁、锌、锰和微量元素的含量相对较大。由于新疆阿魏菇资源一直没有得到充分的应用和重视,对于其的开发利用处于初级加工方面,深加工方面如阿魏菇中的活性成分从分离纯化、理化性质和生物学活性等没有进行系统深入的研究。本研究利用碱溶酸沉的方法提取阿魏菇中的蛋白质,对其进行酶解制备具有抗氧化活性的多肽,并对抗氧化活性肽进行活性研究,为阿魏菇的深加工提供相应的理论基础。
　　(1)利用超声波辅助碱溶酸沉提取阿魏菇蛋白,并通过响应面法优化提取条件。在单因素的基础上,根据Central Composite中心组合设计原理,运用Design-Expert.8.05数据分析软件,对阿魏菇蛋白提取进行了三因素五水平的优化分析。确定的最佳提取条件:pH10、超声温度27.09℃、超声时间9.45min、液料比5,在此条件下的蛋白提取率的理论值达到17.68%。
　　(2)为了建立酶解阿魏菇蛋白制备抗氧化多肽的最佳优化条件,采用胃蛋白酶和胰蛋白酶分步水解的方法。运用四因素三水平的正交试验确定胃蛋白酶的酶解优化组合,以水解度和DPPH自由基清除能力为响应值,最终确定酶解的最优组合为:酶解时间2h,酶添加量8000U/g,底物浓度1%, pH2。在此基础上,采用响应面分析法研究胰蛋白酶酶解时间、酶添加量、pH、底物浓度对工艺的影响,以羟自由基(·OH)清除能力为响应值,确定的酶解最优条件为:酶解时间1.42h,酶添加量7744.93U/g,pH7.96,底物浓度1.35%,此条件下的·OH清除率为74.7%,与理论值75.59%相对误差在1%以内,说明所建立的模型具有较好的拟合性。
　　(3)采用四种测定抗氧化能力的方法验证胃蛋白酶-胰蛋白酶酶解的阿魏菇抗氧化多肽的抗氧化活性。在测定清除DPPH自由基和?OH自由基的能力时与抗氧化活性高的抗坏血酸作对照,结果表明阿魏菇抗氧化肽清除DPPH自由基和?OH自由基的能力比抗坏血酸的清除能力略低,但也表现出较高的清除能力。同时,清除O2-。自由基和还原Fe3+的能力也较强。
　　(4)以胃蛋白酶-胰蛋白酶联合酶解阿魏菇多肽水解物为原料,首先利用超滤法分离阿魏菇水解液,使用10kD的超滤膜,将阿魏菇水解液分离成>10kD的多肽组分和<10kD的多肽组分,并且<10kD的多肽组分的的·OH自由基清除能力和DPPH自由基清除能力均高于>10kD的多肽组分。将<10kD的多肽组分经DEAE-32纤维素分离后在220nm处检测洗脱峰,得到3个洗脱峰,并且组分P3的羟基清除能力较高。将DEAE-32纤维素分离得到的P3组分由葡聚糖凝胶SephadexG-25分离,在220nm处得到五个洗脱峰,组分P3-2的羟自由基清除最高,其分子量大约为1862Da。

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第一章 文献综述

1.1 新疆阿魏菇的现状

1.2 国内外蛋白提取工艺

1.3 生物活性肽的研究现状

1.4 生物活性肽的分离纯化

1.5 本课题研究的目的意义

第二章超声波辅助提取新疆阿魏菇蛋白质工艺优化

2.1 引言

2.2 材料与方法

2.3 结果与分析

2.4 结论

第三章 胃-胰蛋白酶联合酶解阿魏菇蛋白制备抗氧化多肽

3.1 引言

3.2材料与方法

3.3 结果与分析

3.4 结论

4.1引言

4.2 材料与方法

4.3 实验结果

4.4 结论

第五章 新疆阿魏菇抗氧化肽的初分离纯化

5.1 引言

5.2 材料与方法

5.3 实验结果

5.4 结论

第六章 总结与展望

6.1 总结

6.2 本研究的创新之处

6.3 展望

参考文献

致谢

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