慢性乙型肝炎免疫耐受和免疫清除期淋巴细胞基因表达谱的差异

摘要

目的: 乙型肝炎病毒（HBV）是导致肝脏疾病的主要致病因子，许多的慢性乙型肝炎患者最终可发展成为肝硬化和原发性肝癌。迄今为止，乙型肝炎的发病机理和HBV引发免疫耐受的机制尚未完全阐明。本课题研究慢性乙型肝炎患者免疫耐受期和免疫清除期体内淋巴细胞基因表达谱的差异，探讨差异表达基因与HBV感染引起的免疫耐受及免疫清除的关系。 方法: 选择慢性乙型肝炎（HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性）病例，根据丙氨酸氨基转移酶（ALT）高低划分免疫耐受组、免疫清除组：以健康查体者为正常对照组。采集新鲜血液，EDTA抗凝，淋巴细胞分离液分离淋巴细胞，一步法提取总RNA，用逆转录法标记cDNA探针，荧光染料Cy3标记正常对照组，Cy5标记免疫耐受组和免疫清除组。采用高通量基因表达谱芯片（7，267个基因）进行芯片杂交，使用ScanArray Express共聚焦扫描仪扫描基因芯片，PerkinElmer LAS软件进行数据分析。 结果: 比较免疫耐受组与正常对照组发现差异表达基因419个，表达上调206个，下调213个；免疫清除组与免疫耐受组差异表达基因共213个，上调111个，下调102个；两组共有但差异表达方向相反的基因47个，在免疫耐受期表达下调但免疫清除期上调6个，在免疫耐受上调免疫清除期下调41个。 结论: 使用表达谱基因芯片检测慢性乙型肝炎患者免疫耐受、免疫清除期淋巴细胞的基因表达，结合HBV感染的自然史，初步建立了HBV免疫耐受及免疫清除发生时淋巴细胞的差异表达基因谱。 通过比对免疫耐受和免疫清除发生后基因表达谱的改变，筛选出47个发生反向差异表达的基因。这些基因的反向差异表达可能在HBV的免疫耐受和免疫清除中的发挥了重要的作用。其一方面揭示了HBV逃避宿主免疫系统清除时对淋巴细胞产生的主动性调节机制，另一方面反映了免疫清除发生时机体淋巴细胞应答调机制。

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