地西他滨逆转K562/ADR细胞多药耐药性、提高胞内阿霉素浓度体外研究

摘要

目的:白血病是造血系统的恶性肿瘤,近年来,其发病率不断上升,治疗手段主要是造血干细胞移植和化疗。造血干细胞移植是可能治愈白血病的唯一手段,但由于年龄和供者限制,多数白血病患者无法行造血干细胞移植,但化疗易出现耐药和复发。DNA甲基化导致的抑癌基因失活是肿瘤发生的主要机制之一。DNA高甲基化在恶性血液病中广泛存在。多种研究发现甲基化修饰可以用药物逆转,而去甲基化治疗的作用机理不同于传统化疗和造血干细胞移植,使提高耐药和复发白血病患者缓解率成为可能。地西他滨(decitabine DCA)是一种2-脱氧胞苷类似物,研究证实地西他滨有抗肿瘤活性且表现为剂量相关的双重机制,高浓度时具有细胞毒作用,低浓度时具有去甲基化作用。本研究旨在观察地西他滨联合阿霉素(ADR)对白血病K562耐药细胞株多药耐药性的逆转作用,探讨其治疗白血病的可行性。
　　 方法:以不同浓度的DCA联合ADR处理K562/ADR细胞72小时,同时设立仅加入DCA的对照组1和仅加入ADR的对照组2,用盼蓝染色方法研究药物对K562/ADR细胞生长曲线的影响,用四甲基偶氮唑盐实验测定不同浓度的DCA与不同浓度的ADR对K562/ADR细胞的杀伤活性,用流式细胞仪检测K562/ADR细胞膜P糖蛋白含量及胞内ADR.浓度,以逆转录聚合酶链反应(reverse transcription Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)方法检测K562/ADR细胞P15INK4B基因的表达,用DNA电泳检测K562/ADR细胞凋亡情况。
　　 结果:DCA联合ADR对白血病K562/ADR耐药细胞株生长抑制作用,提高了药物对K562/ADR细胞的杀伤活性,观察到K562/ADR耐药细胞株耐药蛋白表达降低、胞内ADR浓度提高,未检测到P15INK4B基因的表达,观察到经DCA联合ADR作用后K562/ADR细胞凋亡。
　　 结论:
　　 1.DCA联合ADR可逆转白血病K562/ADR耐药细胞株多药耐药性。
　　 2.DCA联合ADR可提高白血病K562/ADR耐药细胞株胞内ADR浓度。
　　 3.DCA作用于白血病K562/ADR耐药细胞株的靶点可能不是P15INK4B基因。