Pim1通过调节核糖体生物合成影响前列腺癌发生发展的研究

摘要

目的:
　　明确Pim1对前列腺癌细胞的核糖体生物合成的影响，并初步揭示其作用机制.
　　方法:
　　通过构建Pim1 shRNA，并用其转化感受态细胞，经扩增后提取高浓度质粒，随后用Pim1 shRNA转染PC3细胞，通过含有嘌呤霉素的培养基筛选后，行单克隆细胞培养，即得到稳定的转染株；分别应用实时定量qPCR及蛋白质免疫印迹技术检测转染后细胞中Pim1的mRNA表达量以及蛋白水平；运用蔗糖梯度离心技术分离前列腺癌PC3细胞系的核糖体，并提取各层离心产物的蛋白质成分，利用Westernblot检测Pim1的分布规律，了解其与核糖体各亚基是否存在相互作用关系；使用蔗糖梯度离心技术分别分离PC3、Pim1低表达PC3细胞系及Pim1低表达阴性对照PC3细胞系的核糖体，利用UV检测器检测核糖体各亚基的含量在3种细胞系中的差异；进一步运用RT-qPCR检测在受影响亚基中具体受影响的核糖体蛋白。所有需要统计分析的实验数据全部使用统计软件SPSS18.0进行分析。
　　结果:
　　1. Pim1 shRNA转化的感受态细胞在扩增后提取获得了高浓度的Pim1 shRNA；通过Lipofectamine2000介导将Pim1 shRNA成功转染入PC3细胞，通过嘌呤霉素培养筛选及单克隆细胞培养，RT-qPCR及westernblot检测单克隆细胞株中Pim1稳定低表达；
　　2.蔗糖梯度离心及Westernblot检测发现Pim1的分布与核糖体40S小亚基、80S核糖体及多聚核糖体的分布密切相关，而与核糖体60S大亚基的分布无关，其差别具有统计学意义；
　　3.蔗糖梯度离心及UV检测器检测发现Pim1低表达时，核糖体40S小亚基、80S核糖体及多聚核糖体的表达降低；RT-qPCR检测发现，Pim1低表达时，核糖体40S小亚基的RPS6、RPS21的表达水平降低。
　　结论:
　　1．Pim1的分布与核糖体40S小亚基、80S核糖体及多聚核糖体的分布密切相关，而与核糖体60S大亚基的分布无关，其差别具有统计学意义，表明Pim1可与核糖体40S小亚基、80S核糖体及多聚核糖体相互作用；
　　2. Pim1低表达时，核糖体40S小亚基、80S核糖体及多聚核糖体的表达降低；RT-qPCR检测发现，Pim1低表达时，核糖体40S小亚基的RPS6、RPS21的表达水平降低。表明Pim1可以通过影响核糖体小亚基中RPS6、RPS21的表达，影响核糖体40S小亚基、80S核糖体及多聚核糖体的生物合成，影响了前列腺癌的发生发展。

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缩略语/符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

1.对象和方法

1.1 研究对象

1.2 研究方法

2结果

2.1获得Pim1稳定低表达PC3细胞株

2.2 Pim1低表达对PC3细胞核糖体生物合成的影响

2.3 Pim1与核糖体40S小亚基、80S及多聚核糖体存在相互作用

2.4 Pim1低表达时RPS6、RPS21的表达水平降低

3讨论

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述: Pim1作为肿瘤治疗靶点的研究进展

致谢