连翘酯苷对脓毒症大鼠血清细胞因子水平和组织CD88mRNA表达的影响

摘要

目的：
　　探索连翘酯苷下调脓毒症血清细胞因子水平及抑制脓毒症大鼠血清补体C5a及其受体CD88上调的潜在免疫学机制，为基于特定免疫机制的连翘酯苷靶向治疗脓毒症提供实验依据。
　　方法：
　　采用盲肠结扎穿孔法(CLP)制备大鼠脓毒症模型。选择雄性Wistar大鼠210只，按随机数字表法分为3组：正常组(n=15)、假手术组(n=15)、治疗组(n=90)、模型组(n=90)。治疗组根据不同时间点(24h、48 h及72h)随机分为3个亚组(n=30)，模型组同理随机分为3个亚组(n=30)。治疗组分别于CLP术后0、12、24、48、60 h依次尾静脉注射连翘酯苷注射液，每次注射剂量为0.5 ml；模型组、正常组及假手术组同理给予等量生理盐水尾静脉注射。术后根据不同时间点腹主动脉采血并取大鼠肺、肝、肾组织。大鼠动脉血离心取血清，采用ELISA法检测脓毒症大鼠血清中细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6、MIF、HMGB1)的水平。qPCR法检测脓毒症大鼠肺、肝、肾组织CD88mRNA的表达。HE染色观察脓毒症大鼠肺、肝、肾组织的组织细胞形态学改变。免疫组织化学法观察脓毒症大鼠肺、肝、肾组织C5aR（CD88）的表达。并进行统计分析。
　　结果：
　　1、ELISA法测定脓毒症大鼠血清 TNF-α水平：治疗组24h与模型组24h比较有统计学差异（P=0.017）。血清IL-1β水平：治疗组24h与模型组24h比较有统计学差异（P=0.000）。血清IL-6水平：治疗组与模型组各时间段比较均无统计学差异。血清MIF水平：治疗组与模型组各时间段比较均无统计学差异。血清HMGB1水平：治疗组与模型组各时间段比较均无统计学差异。
　　2、qPCR法测定脓毒症大鼠肺、肝、肾组织CD88mRNA的表达：脓毒症大鼠肺组织中，治疗组72h与模型组72hCD88mRNA表达比较有统计学差异（P=0.036），治疗组48h与模型组48hCD88mRNA表达比较有统计学差异（P=0.010），治疗组24h与模型组24hCD88mRNA表达比较无统计学差异。脓毒症大鼠肝组织中，治疗组与模型组各时间段 CD88mRNA的表达比较均无统计学差异。脓毒症大鼠肾组织中，治疗组与模型组各时间段CD88mRNA表达比较均无统计学差异。
　　3、HE染色观察脓毒症大鼠肺、肝、肾组织细胞结构大致正常，无细胞水肿及坏死。
　　4、免疫组织化学法观察到CD88蛋白主要定位于细胞胞膜,胞浆部分染色,呈棕黄色或棕褐色,染色均一,在实验各组中各时间段肝、肾组织的表达是低表达；正常组和假手术组的肺组织CD88表达为低表达，治疗组和模型组的各时间段肺组织CD88表达均显著，为高表达。
　　结论：
　　1、连翘酯苷能降低脓毒症大鼠24h血清TNF-α的表达。连翘酯苷能降低脓毒症大鼠24h血清 IL-1β的表达。
　　2、连翘酯苷可下调脓毒症大鼠72h和48h肺组织CD88mRNA表达。

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缩略语/符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

1对象和方法

1.1实验动物

1.2实验耗材及试剂

1.3实验器材及仪器

1.4主要溶液的配置

1.5动物模型制备

1.6分组及给药

1.7标本采集及处理

1.8观察指标

1.9 ELISA法测定脓毒症大鼠血清细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6、MIF、HMGB1)的表达

1.10实时荧光定量PCR测定脓毒症大鼠肺、肝、肾组织CD88mRNA的表达

1.11HE染色及免疫组织化学染色观察脓毒症大鼠肺肝肾CD88的表达

1.12统计学方法

2实验结果

2.1 ELISA法测定脓毒症大鼠血清细胞因子(TNF-a、IL-1β、IL-6、MIF、HMGB1)的表达

2.2实时荧光定量PCR测定脓毒症大鼠肺肝肾组织CD88mRNA表达

2.3 HE染色及免疫组化技术染色观察脓毒症大鼠肺、肝、肾组织CD88蛋白的表达

3讨论

3.1固有免疫与脓毒症

3.2脓毒症病生理学基础

3.3细胞因子在脓毒症中的作用

3.4过敏毒素C5a及其受体CD88在脓毒症中的作用

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述: C5a及其受体CD88在炎症性疾病中作用的研究进展

致谢