蛹虫草固体培养基中虫草多糖、虫草素提取分离工艺研究

摘要

固体培养方式目前已被广泛用于蛹虫草的培养,蛹虫草固体培养基中富含菌丝,但因没有成熟的工艺对其中的有效成份进行提取分离,目前在培养结束后固体培养基都被作为废物弃掉,不仅造成资源的浪费,对环境也造成一定的影响.随着蛹虫草培养产业规模的不断扩大,对蛹虫草固体培养基如何加工、利用已成为一个迫切需要解决的问题. 本文根据蛹虫草固体培养基有效成份的理化性质,以蛹虫草固体培养基为原料,对影响有效成份提取的工艺条件进行了研究,通过对提取温度、提取次数、提取时间、料液比应用正交实验设计,最终确定用水80℃提取三次,120min/次,料液比为1:15的工艺条件为虫草多糖最佳提取工艺条件,并分别采用Sevage法、改良的Sevage法和澄清剂法去除虫草多糖粗品中蛋白,以及DEAE纤维素和葡聚糖凝胶柱层析对虫草多糖进行分离纯化.通过对溶剂浓度、提取次数、提取时间、料液比进行正交实验设计,最终确定用75﹪乙醇超声波提取三次,40min/次,料液比为1:20的工艺条件为虫草素最佳提取工艺条件,并分别采用阴、阳离子交换树脂柱层析和硅胶柱层析对虫草素进行分离纯化.通过采用苯酚一硫酸法和HPLC对提取出的虫草多糖和虫草素进行含量测定,确定了不同纯化方法之间的差异. 对虫草多糖和虫草素提取的工艺条件和路线进行分析,结合生产实际,在小试确定的提取、纯化方法基础上进行以蛹虫草固体培养基为原料提取虫草多糖和虫草素的放大实验,确定了综合提取的工艺条件和路线,即采用热水回流提取法进行初提,用醇沉法分离虫草多糖并以Sevage法除蛋白；以乙醚萃取,用阴离子交换树脂层析法分离、纯化虫草素的工艺路线.经测定,除蛋白后的虫草多糖的纯度均大于50﹪,虫草素精品的纯度均大于97﹪. 本课题来源于生产实际,研究结论为相关企业对蛹虫草固体培养基的加工、利用提供了技术依据.

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前言

第一章文献综述

1.1蛹虫草中的化学成分

1.1.1虫草多糖类

1.1.2氨基酸类、糖醇和甾醇类

1.1.3核苷类化合物

1.1.4肽类及维生素类

1.1.5无机元素及其他类

1.2蛹虫草的药理作用及临床应用

1.2.1对免疫系统的增强作用

1.2.2抗肿瘤作用

1.2.3对心脑血管的作用

1.2.4对血小板的作用

1.2.5广谱抗菌性

1.2.6对肺气管的作用

1.2.7降血糖作用

1.2.8延缓衰老作用

1.3虫草多糖的研究概况

1.3.1虫草多糖提取纯化技术

1.3.2虫草多糖的结构分析

1.3.3虫草多糖药理功能

1.3.4虫草多糖研究的展望

1.4虫草素的研究概况

1.4.1虫草素的提取纯化研究

1.4.2虫草素的结构分析

1.4.3虫草素的药理作用

1.4.4虫草素研究的展望

1.5蛹虫草的开发利用

第二章虫草多糖提取分离

2.1试验仪器与材料

2.2方法与结果

2.2.1虫草多糖最佳提取工艺的研究

2.2.2虫草多糖的分离纯化

2.2.3虫草多糖含量测定

2.2.4虫草多糖V的组分分析

2.3小结

第三章虫草素提取分离

3.1试验仪器与材料

3.2方法与结果

3.2.1虫草素最佳提取工艺的研究

3.2.2虫草素的提取工艺

3.2.3虫草素的分离

3.2.4虫草素的含量测定

3.2.5虫草素不同分离方法的比较研究

3.2.6虫草素结晶的鉴定

3.3小结

第四章虫草多糖与虫草素综合提取分离研究

4.1放大实验

4.1.1放大实验工艺流程设计

4.1.2放大实验设备、材料(试剂)及原料

4.1.3实验过程

4.2放大实验结果与讨论

4.3提取过程注意事项

第五章结论与展望

5.1结论

5.2展望

参考文献

致谢