比目鱼皮抗氧化肽的制备及分离纯化

摘要

本文以比目鱼加工废料中的鱼皮为原料,制备出具有较强抗氧化功能的胶原蛋白肽粉,测定其抗氧化活性,对抗氧化肽分离纯化研究。设计了年产10吨胶原蛋白肽粉的工艺,研制了两种含胶原蛋白肽的配方。主要研究内容如下:
　　(1)比目鱼皮的预处理工艺优化。对比5％Na2CO3溶液、0.05MTris-HCl、异丙醇:乙醚=1:1(v/v)等溶剂的脱脂效果,筛选出异丙醇:乙醚=1:1(v/v)作为脱脂剂,得到脱脂工艺参数为:脱脂时间为36h,脱脂温度为20℃,料液比为1:10。对比0.1MNaOH溶液、2.5%NaCl、6.5%NaCl等试剂的除杂蛋白的效果,筛选出0.1MNaOH作为除杂试剂,得到的除杂工艺参数为:料液比为1:30,除杂时间为36h,除杂温度10℃。
　　(2)比目鱼皮胶原多肽的制备工艺优化。以水解度和多肽得率为指标,筛选出最佳水解酶为中性蛋白酶:胰蛋白酶=1:1(U/U),确定的水解时间为4h。以pH、温度、酶用量为因素,对酶解工艺进行曲面响应优化,水解度和多肽得率两个模型均是显著的,在最佳工艺参数pH7.3,温度51.8oC,E/S2776U/g条件下,最终的水解度为19.5%,多肽得率为68.28%,且试验值和理论值吻合较好。液质联用测得所制备的胶原多肽分子量集中分布在900~1600Da之间。氨基酸分析仪测得该胶原多肽含有丰富的抗氧化活性氨基酸。进一步对比目鱼皮胶原多肽的抗氧化活性进行测定表明,胶原多肽具有较好的自由基清除能力(胶原多肽的浓度为5mg/ml时,羟基清除率39.8%、超氧根清除率32.2%、DPPH清除率15.38%),同时具有较强的还原能力、脂质过氧化抑制能力、亚铁离子螯合能力。
　　(3)比目鱼皮抗氧化肽的制备工艺优化及分离纯化。以DPPH清除率为指标,筛选出制备抗氧化肽的最佳单酶为胰蛋白酶。以pH、温度、酶用量为因素,对制备抗氧化肽的酶解工艺进行曲面响应优化,得最佳工艺参数:pH6.62,温度48.2oC,E/S2840U/g。在此最佳工艺参数下,抗氧化肽的DPPH清除能力为23.09%,且试验值和理论值吻合较好。依次经SephadexG-25凝胶过滤、SephadexG-10凝胶过滤、RP-HPLC等分离方法,得到纯度较高的组分。
　　(4)年产10吨胶原多肽的工艺设计。设计开发了以比目鱼皮为原料年产10吨胶原多肽生产工艺,其中胶原多肽的得率为60.82%,纯度为75.05%。对工艺进行了经济效益分析,可实现年销售收入500万元,净利润达322.4万元。
　　(5)开发配制了两种含胶原蛋白肽的配方。研究配制了胶原多肽-阿胶口服液和胶原多肽泡腾片。

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第一章 文献综述

1.1多肽

1.2生物活性肽的制备方法

1.3抗氧化活性肽的国内外研究进展

1.4课题背景、意义及研究内容

第二章 比目鱼皮预处理工艺的研究

2.1材料和仪器

2.2实验方法

2.3结果及讨论

2.4本章小结

第三章 比目鱼皮多肽的酶法制备及抗氧化活性的研究

3.1实验材料和仪器

3.2实验方法

3.3结果及讨论

3.4本章小结

第四章 酶解制备抗氧化多肽及其分离纯化

4.1材料及仪器

4.2实验方法

4.3实验结果及分析

4.4本章小结

第五章 年产10吨胶原多肽工艺流程设计及产品配方研制

5 .1年产10吨胶原多肽的规模设计

5.2胶原多肽产品配方的研制

5.3本章小结

第六章 结论和展望

6.1结论

6.2展望

参考文献

发表论文情况

致谢