Ⅰ型人类免疫缺陷病毒蛋白R（HIV-1Vpr）对胶质瘤作用的体外研究

摘要

目的：探讨Ⅰ型人类免疫缺陷病毒蛋白R(HIV-1Vpr)对人U251和大鼠C6胶质瘤细胞的增殖和凋亡的影响。 方法：1.构建并鉴定含有HIV-1Vpr基因的真核表达载体pUB6/Vpr。2.采用脂质体介导的方法将pUB6/Vpr转染至胶质瘤细胞系U251和C6中，RT-PCR检测Vpr的mRNA在两种细胞中的表达。测定MTT光密度值以观察转染后细胞的增殖活性的变化，细胞计数计算细胞生长抑制率，流式细胞仪检测转染后细胞的凋亡状态和细胞周期的改变。 结果： 1.成功构建HIV-1Vpr基因的真核表达载体pUB6/Vpr。 2.利用脂质体介导pUB6/Vpr转染至胶质瘤细胞系U251和C6中，24小时后提取细胞的RNA进行RT-PCR，可检测到在两种细胞中均有VprmRNA的表达。 3.pUB6/Vpr转染胶质瘤细胞系U251和C6后，可引起：①转染后的U251和C6细胞增殖能力受到抑制，MTT吸收值在转染后24小时、48小时和72小时均下降，与不含HIV-1Vpr基因的空载体pUB6/V5-HisA组相比，有统计学意义。②U251和C6细胞的增殖能力有所下降，U251细胞在pUB6/Vpr转染后48小时的生长抑制率为18.5％，C6细胞在pUB6/Vpr转染后36小时的生长抑制率为39.7％。③转染pUB6/Vpr后72小时，U251细胞处于G2/M期的细胞数高于pUB6/V5-HisA对照组。④光镜下发现pUB6/Vpr转染U251细胞一定时间后细胞出现凋亡表现，流式细胞仪检测显示转染pUB6/Vpr后的U251细胞与pUB6/V5-HisA组相比，在转染后24小时早期凋亡率增多，并且在48和72小时晚期凋亡率和/或死亡率增多。 结论：HIV-1Vpr能够抑制胶质瘤细胞系U251和C6的增殖活性，诱导细胞周期停滞于G2/M期，并能促进细胞的凋亡。

目录

文摘

英文文摘

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第一章前言

第二章实验材料与方法

第三章实验结果

第四章讨论

第五章结论

参考文献

附录

致谢

综述HIV-1 Vpr抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的研究进展

个人简历、在学期间发表的学术论文