鹅脂肪代谢基因多态性与屠宰性状的相关分析及其组织表达差异研究

摘要

脂滴包被蛋白(PLIN)和脂肪分化相关蛋白(ADFP)定位于脂滴表面,是脂滴相关蛋白家族(PAT)中的成员。它们不仅参与脂质代谢,而且在动脉粥样硬化、2-型糖尿病等疾病的发展中也起作用。PPARγ是过氧化物酶体增殖物激活受体家族(PPARs)的成员之一,在转录水平调控多种参与脂肪酸转运和代谢的基因,有广泛的生物学效应。
　　 本试验以鹅肝脏和脂肪组织为试验材料,通过RT-PCR扩增获得了鹅PLIN基因的全编码区序列(1589bp)(GenBank accession numbers:GU938447),编码527个氨基酸,克隆获得鹅ADFP基因的部分序列(1304bp)。通过多种生物信息学方法分析,鹅PLIN基因序列与鸡PLIN基因的序列一致性达到85％,鹅ADFP基因序列与鸡、鸭ADFP序列一致性分别达到93％和96％。对其保守结构域预测,确定两条氨基酸序列具有PAT家族的结构特征,证实本试验克隆获得的ADFP和PLIN序列为鹅PAT家族成员ADFP和PLIN基因。
　　 本试验以浙东白鹅和朗德鹅为材料,采用SYBR greenⅡ定量PCR分析ADFP、PLIN和PPARγ基因在鹅9个生长点,两个品种不同组织间表达差异。试验结果表明,ADFP基因在鹅的各组织广泛表达,PLIN和PPARγ基因在鹅脂肪组织高表达。并且ADFP、PLIN和PPARγ基因在鹅不同生长阶段各有优势表达组织,同一组织中也有表达的优势时间点,基因在浙东白鹅和朗德鹅品种间表达差异显著。脂肪组织中,ADFP表达量随机体的生长发育呈先升后降的趋势,而PLIN表达量随机体的生长发育呈先降后升的趋势,28日龄为两个基因表达值变化的转折点。相对而言,PPARγ基因在脂肪组织表达量低于ADFP和PLIN。由此推测,随着脂肪细胞的发育成熟,ADFP和PLIN基因对鹅脂肪组织的代谢发挥主要调控作用。
　　 本试验以浙东白鹅为材料,采用PCR-SSCP方法,扫描ADFP和PPARγ基因外显了区域的多态位点。结果发现,在ADFP基因的编码区存在9个突变位点中,等位基因G、G、G、C、T、G、C、T、C依次为SNP1、SNP2、SNP3、SNP4、SNP5、SNP6、SNP7、SNP8和SNP9的优势等位摹因。ADFP基因突变位点在群体的屠宰性状关联分析结果显示:SNP2对浙东白鹅胸肌重、胸肌率的遗传效应达到极显著水平,对腿肌率的遗传效应达到显著水平;SNP3对浙东白鹅胸肌率的遗传效应达到极显著水平,对胸肌重和腿肌重的遗传效应达到显著水平。在PPARγ基因外显予区域发现一个SNP(A/G)位点,突变位点在群体的屠宰性状关联分析结果显示:SNP对浙东白鹅腿肌率的遗传效应达到显著水平,AG基因型个体的腿肌率显著地高于AA型个体。这表明ADFP基因和PPARγ基因突变位点与鹅屠宰性状显著相关。