家禽VLDLR基因多态性与生长和屠宰性状的相关分析及MDV对VLDLR mRNA表达的影响

摘要

极低密度脂蛋白受体(very low density lipoprotein receptor，VLDLR)是低密度脂蛋白受体家族中的一员，主要作用是通过与富含ApoE的脂蛋白结合来调控甘油三酯的代谢。在动物体内，VLDLR主要分布于骨骼肌、脂肪、心脏等组织，在肝脏中分布较少。本实验在前期实验的基础上，对高邮鸭VLDLR基因的多态性进行了进一步的分析，在5'端UTR及信号肽编码区位置检测出4出个新的SNPs位点，同时对VLDLR基因多态性与高邮鸭生长性状和屠宰性状进行了相关分析;在通过RT-PCR的方法对正常鸭和鸡不同组织VLDLRmRNA的表达分布情况进行研究的基础上，对MD鸡不同组织VLDLR mRNA的表达进行检测，以期研究发生肿瘤的禽组织VLDLR mRNA的表达变化情况。
　　1高邮鸭VLDLR基因5'端UTR及信号肽编码区多态性与生长和屠宰性状的关联分析
　　本实验以高邮鸭群体为研究对象，采用PCR扩增、测序法等方法测定了267个样VLDLR基因5'端UTR及信号肽编码区部分序列，在该段序列中检测出4个SNPs(g.151G＞A、g.170C＞T、g.206A＞G、g.278-295+＞-)，基于这4个SNPs位点，采用PHASE2.0软件构建了8种单倍型，其中ACG+为主要单倍型，频率高达29.81％; GTG+和ACA+单倍型频率最低，均为0.96％。另外，在8个单倍型的基础上构建了15种双倍型，其中H4H8频率最高，为28.16％。关联分析结果表明，在第6周龄，双倍型H1H1的体重显著高于H2H8型(P＜0.05），在7至10周龄，双倍型H1H1的体重极显著高于H2H8型(P＜0.01)，显著高于H4H8型(P＜0.05)。与此同时，双倍型H5H8的腹脂率极显著高于H1H1型和H2H8型(P＜0.01)，显著高于H4H8型(P＜0.05），双倍型H4H8的腹脂率显著高于H1H1型(P＜0.05）。最小二乘法分析结果表明，双倍型H1H1的平均体重最高，H2H8最低;双倍型H2H8的屠宰率、半净膛率和全净膛率最高;双倍型H5H8的腹脂率最高，H4H8型次之，H1H1型最低。表明双倍型H1H1为优势组合，有可能用来作为提高高邮鸭胴体性能和选择高瘦肉率优良品种的分子标记。
　　2家禽VLDLR基因mRNA在不同组织中的表达分析
　　为研究VLDLR在肿瘤发生中的表达变化，本实验首先对VLDLR基因在鸭和鸡不同组织内的表达水平和分布情况进行探讨。
　　快速采集高邮鸭和成年海兰白鸡骨骼肌、肺脏、脂肪、脾脏、肝脏5种组织提取RNA，反转录成cDNA保存于-20℃备用。根据GenBank中的鸭和鸡VLDLR基因序列设计引物并进行RT-PCR扩增，检测5种组织中VLDLR基因的相对表达水平。结果显示VLDLR基因在鸭和鸡不同组织间的表达存在差异，均表现为骨骼肌表达量最高，肺脏和脂肪组织次之，肝脏表达量最低。鸭的5种组织相对表达量表现为为骨骼肌(57.47±0.10)＞肺脏(11.72±0.28)＞脂肪组织(4.13±0.05)＞脾脏(1.76±0.14)＞肝脏(1.00±0.15);鸡表现为骨骼肌（10.95±0.14）＞肺脏（3.87±0.23）＞脂肪组织（3.02±0.11）＞脾脏（2.31±0.08）＞肝脏（1.00±0.17）。二者相同，脾脏、肺脏、骨骼肌和脂肪内VLDLRmRNA的表达均极显著高于肝脏(P＜0.01)，肺脏内VLDLR mRNA的表达高于脂肪，二者差异极显著(P＜0.01)。本实验显示了VLDLR基因在肺脏有较高的表达量，脾脏也有一定的表达。
　　3 MDV对鸡VLDLR mRNA表达的影响
　　本实验研究对象为自然条件下感染MDV鸡、MDV RB1B毒株攻毒鸡和禽霍乱(PM)鸡。采集3种鸡肝脏、脾脏、肺脏、骨骼肌、脂肪等组织提取RNA，反转录成cDNA于-20℃保存备用。根据GenBank中的鸡VLDLR基因序列设计引物并进行RT-PCR扩增，检测鸡VLDLRmRNA在5个组织中的相对表达水平。结果显示VLDLR基因在3种鸡不同组织间的相对表达存在差异。在感染MDV鸡不同组织内的相对表达情况为骨骼肌(7.88±0.095)＞肝脏(1.00±0.041)＞肺(0.649±0.027)＞脂肪(0.168±0.053)＞脾脏(0.05±0.021)，脾脏、肺脏和脂肪组织内VLDLRmRNA的表达量均极显著低于肝脏的表达量(P＜0.01)，同时VLDLR在肺脏的表达量比脂肪组织高，表现为差异极显著(P＜0.01)。在攻毒MDV RB1B毒株鸡不同组织的相对表达情况为骨骼肌(30.18±0.074)＞脂肪(5.13±0.061)＞肺(2.99±0.178)＞肝脏(1.00±0.390)＞脾脏(0.41±0.117)，脾脏内VLDLRmRNA的表达量低于肝脏，旦两者差异不显著，肺脏、骨骼肌和脂肪组织内VLDLR表达量均显著高于肝脏(P＜0.01)，脂肪内VLDLR mRNA的表达高于肺，二者差异极显著(P＜0.01)。在PM鸡不同组织的相对表达情况为骨骼肌(84.83±0.183)＞肺(13.17±0.307)＞脂肪(2.72±0.050)＞脾脏(1.17±0.214)＞肝脏(1.00±0.343)，脾脏的表达量略高于肝脏，二者差异不显著，肺脏、骨骼肌和脂肪内VLDLR mRNA的表达极显著高于肝脏(P＜0.01)，肺脏内VLDLR mRNA的表达高于脂肪，二者差异极显著(P＜0.01)。结果显示，MDV感染鸡肝脏（发生肿瘤的肝脏）组织中VLDLR mRNA的表达超过了脂肪、肺脏等组织，而攻毒MDV RB1B毒株后未发生MDV感染或被其他疾病感染（如PM）的肝脏内VLDLR mRNA的表达量依然较低。

目录

摘要

符号说明

第一部分 文献综述 极低密度脂蛋白受体的研究

1 LDLR家族

2 VLDLR的克隆与命名

3 VLDLR基因的特点

4 VLDLR的组织表达特点与表达调控

5 VLDLR的生物学特点与功能

6 VLDLR基因的多态性研究

参考文献

第二部分 研究论文

1 实验材料与方法

2 结果与分析

3 讨论

参考文献

第二章 家禽VLDLR基因mRNA在不同组织中的表达分析

1 实验材料

2 实验方法

3 结果与分析

4 讨论

参考文献

第三章 MDV对鸡VLDLR mRNA表达的影响

1 实验材料与方法

2 实验结果

3．讨论

参考文献

全文总结

致谢

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