四川地区猪链球菌流行调查及其病原特性研究

摘要

猪链球菌病是猪场的一种常见细菌性传染病，呈世界性分布，给全球养猪业带来巨大损失。该病主要引起猪的脑膜炎、关节炎、败血症、心内膜炎、脑炎、流产、多发性浆膜炎和支气管肺炎等。该菌可分为35个血清型，血清1型～34型和1/2型。研究发现，对猪致病的血清型主要有1型、2型、7型和9型，尤其2型毒性最强，其中3型还与肺炎有关。为了解四川地区猪链球菌病的感染情况、流行的血清型、致病性和耐药性，本实验主要做了以下研究。
　　1、四川地区猪2型链球菌血清流行病学调查
　　为了解四川地区猪2型链球菌的流行情况，本研究应用商品化猪2型链球菌ELISA检测试剂盒对近两年从四川成都、雅安、资阳等15市（共32个区县）43家猪场采集526份猪血清进行猪2型链球菌血清抗体检测。结果猪2型链球菌阳性猪场33个，猪场阳性检出率为76.74％。212份血清样品检测阳性，阳性检出率为40.30％，表明四川地区猪2型链球菌感染严重。其中种母猪的阳性检出率最高，其次为育肥猪和保育猪，分别为65.77％、39.88％、29.15％。
　　2、四川地区流行猪链球菌病原优势血清型调查
　　对四川成都、雅安、广安等12个市(18县)猪场采集的病料进行猪链球菌的分离，共分离到34株猪链球菌。用PCR分型方法对分离株进行血清1型、2型、7型、9型和3型鉴定，结果2型16株，占47.1％，7型9株，占26.5％，1株9型，占2.9％，3型4株，占11.8％，未定型4株，占11.8％。表明四川地区存在多种血清型猪链球菌感染，其中2型为主要流行血清型，其次为血清7型和3型。
　　3、猪链球菌四川分离株主要毒力基因检测分析及2型代表株致病性研究
　　对34株猪链球菌3种主要毒力基因mrp、epf和sly进行PCR检测，结果9株为mrp+(26.5％)、14株为epf+(41.2％)、26株为sly+(76.5％)。16株猪2型链球菌中存在3个毒力基因表型，mrp+epf+sly+为9株(56.3％)、mrp-epf+sly+为5株(31.3％)、mrp-epf-sly-为2株(12.5％)，其中mrp+epf+sly+为优势基因型。对16株猪2型链球菌分离株的4种毒力基因cps2J、mrp、epf和sly的PCR扩增产物进行测序分析，16株分离株的4种毒力基因核苷酸序列与国内外猪链球菌参考株相应毒力基因序列同源性分别为98.5％～100％、99.6％～100％、99.4％～100％、98.2％～100％，表明四川地区流行的猪2型链球菌的毒力基因相对稳定，变异程度小。对3株猪2型链球菌代表株进行小鼠致病性试验表明毒力基因型为mrp+epf+sly+的菌株毒力最强，其次是mrp-epf+sly+，mrp-epf-sly-菌株致病力最弱。
　　4、四川地区猪链球菌耐药谱调查
　　用18种临床常用抗生素对34株猪链球菌进行药物敏感性试验，结果四川地区猪链球菌对多种抗生素耐药，耐药性严重。多重耐药谱（70％以上分离株耐药）为庆大霉素-卡那霉素-丁胺卡那霉素-四环素-多西环素-红霉素-阿奇霉素-林可霉素-磺胺甲恶唑。而对阿莫西林、氨苄西林、先锋霉素Ⅴ、头孢曲松等的敏感率在90％以上，在猪场发生猪链球菌病时，可以使用这些抗生素进行治疗。

目录

声明

摘要

符号说明

第一章 文献综述

1 病原学

1．1 分类地位

1．2 培养特性

1．2 血清型

1．3 抵抗力

2 流行病学

3 临床症状及病理变化

4 毒力因子研究进展

4．1 荚膜多糖

4．2 溶菌酶释放蛋白和胞外因子

4．3 溶血素

4．4 谷氨酸脱氢酶

4．5 其他毒力因子

5 检测方法

5．1 微生物学检测方法

5．2 血清学鉴定

5．3 分子生物学方法

6 各地流行的血清型及毒力基因分布

7 耐药性

8 防治

9 研究目的意义

第二章 四川地区猪2型链球菌的血清流行病学调查

1 材料

1．1 血清样品

1．2 主要试剂及仪器

2 方法

2．1 血清采集

2．2 操作步骤

2．3 结果判定

3 结果与分析

3．1 不同生长阶段和饲养规模猪2型链球菌抗体检测结果

3．2 不同地区猪2型链球菌感染情况

4 讨论

5 小结

第三章 四川地区流行猪链球菌病原优势血清型调查

1 材料

1．1 病料来源

1．2 参考菌株

1．3 主要试剂

1．4 主要仪器设备

1．5 主要溶液及其配制

1．6 引物

2 方法

2．1 细菌的分离

2．2 形态学观察和革兰氏染色镜检

2．3 生化鉴定和溶血性试验

2．4 PCR鉴定及分型

3 结果与分析

3．1 细菌的形态及镜检特性

3．2 生化试验和溶血试验结果

3．3 PCR鉴定结果

4 讨论

5 小结

第四章 猪链球菌四川分离株主要毒力基因检测分析及2型代表株致病性研究

1 材料

1．1 菌株

1．2 实验动物

1．3 主要试剂

1．4 主要仪器设备

1．5 主要溶液及其配制

1．6 引物

2 方法

2．1 猪链球菌主要毒力基因的PCR检测

2．2 猪2型链球菌毒力基因的测序及分析

2．3 猪2型链球菌代表株小鼠致病性试验

2．4 病理组织观察

3 结果与分析

3．1 3种毒力基因检测结果

3．2 猪2型链球菌分离株毒力基因序列分析

3．3 动物试验结果

3．4 病理观察

4 讨论

4．1 毒力基因检测结果讨论

4．2 毒力基因序列分析讨论

4．3 猪2型链球菌致病性讨论

5 小结

第五章 四川地区流行猪链球菌耐药谱调查

1 材料

1．1 菌株

1．2 药敏纸片

1．3 主要试剂

1．4 主要溶液及其配制

2 方法

3 结果与分析

3．1 分离株药敏结果

3．2 分离株多重耐药情况

4 讨论

5 小结

第七章 结论

参考文献

致谢

附录