前 言
1材料、试剂与仪器
1.1材料
1.1.1实验菌株
1.1.2液体培养基配方
1.2生化试剂
1.3仪器
2方法
2.1 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的纯化及测定
2.1.1超声波破壁和(NH4)2SO4盐析
2.1.2 DEAE-sepharose阴离子交换层析
2.1.3 Blue-sepharose CL-6B特异结合层析
2.1.4 Sephadex G-200凝胶过滤层析
2.1.5 6-PGADase活力测定
2.1.6蛋白质浓度测定
2.1.7纯度鉴定
2.2 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的性质
2.2.1亚基分子量测定
2.2.2表观分子量测定
2.2.3等电点的测定
2.2.4氨基酸组成分析
2.2.5圆二色谱(CD)分析
2.2.6 pH值对酶活力的影响
2.2.7温度对酶活力的影响
2.2.8 6-PGADase米氏常数Km1(NADP+)和Km2(6-GPA)的测定
2.2.9几种盐对6-PGADase活力的影响
2.2.10 6-PGADase的化学修饰
2.2.116-PGADase的催化曲线
2.2.12两种底物与酶结合相互关系
2.2.13辅酶专一性研究
2.2.14产物抑制研究
3结果
3.1 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的纯化结果
3.2 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的性质
3.2.1 亚基相对分子量
3.2.2 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶表观分子量
3.2.3 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶等电点
3.2.4 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶氨基酸组成
3.2.5 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶圆二色谱(CD)分析结果
3.2.6 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的最适pH值
3.2.7 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的最适温度
3.2.8米氏常数Km1(NADP+)和Km2(6-GPA)的测定
3.2.9部分离子对酶活力的影响
3.2.10部分修饰剂对酶活力的影响
3.2.11 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的催化曲线
3.2.12辅酶专一性研究
3.2.13两种底物与酶结合的相互关系
3.2.14产物抑制研究
4讨论
参考文献
6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶和磷酸戊糖途径的研究进展
一.6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的发现
二.6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶在葡萄糖进入EMP和HMP中的调节作用
三.对结合到6-磷酸葡萄糖酸脱氢上辅酶的荧光研究
四.6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的变异酶性质
五.6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶蛋白质组研究
六.6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶晶体衍射研究
七.6-PGADase催化同构类似底物脱氢的研究
八.6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的催化机制研究
九.6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的医学和生物学意义
Reference
致 谢
声明书
四川大学;