野生和组培川贝母的总生物碱含量测定和定位研究

摘要

贝母为百合科Liliaceae 贝母属Fritillaria L.多种植物的鳞茎，有悠久的使用历史，是我国重要的中药材之一，其功效是清热润肺，化痰止咳。据报导，目前我国贝母属植物有61种，50个变种，5变型。川贝母(Fritillaria cirrhosa D.Don)为我省的十大名贵中药材之一，因其质优效佳而名扬海内外。但由于贝母类药材生物碱的含量低，单体的分离纯化较困难，而且不同种贝母中生物碱的组成复杂，在这种情况下，对川贝母的质量评价很难取得满意的进展。为了进一步研究开发利用祖国的中草药资源，并为中草药现代化提供科学依据，本论文对川贝母进行了以下的研究工作。 作者对组培川贝母的培养基配方进行了研究，选择出了诱导愈伤组织效果较好的培养基配方和促进组培川贝母鳞茎及愈伤组织良好生长和分化的培养基配方。测定了市售川贝母、野生川贝母以及组培川贝母不同部位和生长状态下的总生物碱含量。并应用植物解剖学、组织化学和植物化学的理论和技术相结合的方法对川贝母生物碱进行组织化学定位的研究，初步建立了石蜡切片观察生物碱分布的方法，并应用该方法分析川贝母鳞茎和愈伤组织中生物碱分布的规律。 实验结果表明，川贝母的组织培养中，以MS培养基附加低浓度NAA(lmg/L)与6-BA(0.5mg/L)为最佳诱导愈伤组织的组合；低浓度NAA适宜愈伤组织生长，但高浓度NAA抑制其生长且抑制愈伤组织的诱导；组培川贝母适宜较低蔗糖浓度；病毒唑可能诱导丛生鳞茎和丛生芽的发生。野生川贝母和组培川贝母各部分的总生物碱含量都较市售川贝母为高。组培川贝母总生物碱含量几乎都高于野生川贝母鳞茎。再生鳞茎的折干率和总生物碱含量是组培川贝母各部分中最高的，总生物碱含量为野生鳞茎的1.7倍。7类样品总生物碱含量从高到低的顺序为：组培再生鳞茎>带不定根的愈伤组织>带不定根的褐化愈伤组织>愈伤组织>褐化愈伤组织>野生鳞茎>市售川贝母。组培的再生鳞茎总生物碱含量最高，带不定根的愈伤组织次之。用传统石蜡切片施以番红-碘化铋钾-固绿染色的生物碱定位效果较好；鳞茎中的生物碱主要分布于薄壁细胞内，愈伤组织中的生物碱则主要分布于细胞壁周围；野生川贝母鳞茎中生物碱分布同淀粉粒有一定关系。利用组培方法促进川贝母的生长速率和生产生物碱，操作较简单，开发应用前景好，但仍需要进一步研究。本实验的研究结果为正确掌握组培川贝母合适的药用部位，保证药材质量以及资源保护提供了重要的科学依据。

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论文说明:图表目录

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前言

第一部分组培川贝母的培养基配方研究

1.1引言

1.2材料和方法

1.2.1材料和试剂

1.2.2实验方法

1.3结果和分析

1.3.1愈伤组织诱导率的差异

1.3.2激素，蔗糖和病毒唑较佳浓度分析

1.3.3 4种物质对川贝母愈伤组织的诱导

1.3.4生长情况与分化的差异

1.4讨论

1.4.1植物激素对愈伤组织诱导的调控作用

1.4.2植物激素等物质对组培川贝母分化生长的调控作用

1.4.3组培川贝母的玻璃化

1.4.4组培川贝母的褐化现象

第二部分野生和组培川贝母的生物碱测定

2.1材料和方法

2.1.1材料和试剂

2.1.2实验条件的选择

2.1.3样品总生物碱的测定

2.2结果和分析

2.3讨论

2.4小结

第三部分野生和组培川贝母生物碱的组织化学定位

3.1材料设备和试剂

3.1.1材料和设备

3.1.2试剂

3.2方法

3.2.1组织化学定位试剂的确定

3.2.2切片方法的确定

3.2.3固定液类型和固定时间的选择

3.2.4切片厚度的选择

3.2.5粘片剂的选择

3.2.6衬染方法的选择

3.2.7组织化学定位时间的确定

3.2.8对照切片的处理

3.3结果和分析

3.3.1川贝母生物碱组织化学定位的方法

3.3.2生物碱分布情况

3.3.3生物碱同淀粉粒形态和分布的关系

3.4讨论

3.4.1组织化学定位方法的讨论

3.4.2新鲜和褐化愈伤组织中生物碱分布的区别

3.4.3生物碱同淀粉的关系

3.4.4生物碱的积累

3.4.5不同样品中生物碱含量的区别

3.4.6生物碱定位的手段分析

参考文献

文献综述 贝母属植物的组织培养和川贝母生物碱以及药用植物有效成分组织化学定位的研究进展

致谢

作者在读期间科研成果简介