人原始生殖细胞来源的肝脏细胞

摘要

本研究由4～7周胚胎中分离出人PGC，在体外培养下形成表达人EG细胞标志的细胞集落；对PGC原代培养集落进行诱导，产生增殖能力较强、具有向三胚层分化潜能的原始生殖细胞来源的前体细胞系(PGCP)；将PGCP细胞系移植入胎羊体内，观察其在胎羊体内向肝脏细胞分化的潜能。本论文分为三部分：第一部分，人原始生殖细胞的分离、培养及鉴定。由4～7周人流产胚胎的肠系膜及生殖嵴分离出人PGC细胞。第二部分：人PGC细胞来源的PGCP细胞系。经RT-PCR检测人EG细胞相关基因表达阳性的原代培养细胞集落，在EBM-2培养液中诱导培养，建立PGCP细胞系。第三部分：PGCP细胞在胎羊体内向肝脏细胞的分化。在B超引导下经皮穿刺，将0.3～3×107的PGCP细胞移植入发育40～70天胎羊的腹腔/肝脏内。 结论：1.由早期胚胎分离出的人PGC细胞，体外培养可形成表达人EG细胞相关标志的细胞集落。2.本实验室建立的PGCP细胞系，在体外培养条件下有较强的增殖能力和向多胚层分化的潜能，其中向肝细胞分化的趋势较明显，而且无致瘤性和鼠源细胞污染，是一种较安全、有希望应用于临床治疗的干细胞系。3.PGCP细胞系在羊胚体内可分化形成肝细胞、胆管细胞。这些结果为人EG细胞作为全能干细胞应用于临床治疗提供了理论和实践依据。

目录

论文说明；英文缩略词表

学位论文独创性声明及学位论文使用授权声明

中文详细摘要

英文详细摘要

第一部分人原始生殖细胞的分离、培养及鉴定

前言

实验材料

实验方法

结果

讨论

参考文献

第二部分人PGC细胞来源的PGCP细胞系

前言

实验材料

实验方法

实验结果

1.PGCP细胞的诱导产生、体外培养及PD曲线

2.PGCP细胞三胚层分化相关标志的表达

3.PGCP细胞单克隆化及克隆后细胞分化标志的表达

4.PGCP细胞的表面抗原流式检测

5.PGCP细胞三胚层分化相关基因的表达

6.PGCP细胞致畸胎瘤性检测

7.PGCP细胞Alu探针FISH检测

8.PGCP细胞的核型分析

讨论

参考文献

第三部分PGCP细胞在胎羊体内向肝脏细胞的分化

前言

实验材料

实验方法

结果

1.PGCP细胞胎羊体内移植模型的建立

2.人特异性引物PCR反应检测人PGCP细胞在羊肝内的嵌合

3.人特异性抗体检测在胎羊体内人PGCP细胞分化的肝细胞

4.人特异性线粒体探针FISH与免疫组化双标

5.人特异性Alu探针原位杂交

讨论

参考文献

结论

综述EG细胞的研究进展

致谢

攻读学位期间参加的研究项目及发表的文章