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二十六株灵芝菌丝体抑瘤三萜的研究

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第一章灵芝三萜研究进展和体外抑瘤活性筛选简介

1.1灵芝三萜的化学结构

1.2灵芝三萜的生理活性

1.2.1抗肿瘤作用及机制

1.2.2免疫抑制活性

1.2.3抑制补体激活

1.2.4诱导NAD(P)H:QR(苯醌氧化还原酶)

1.2.5对血小板凝集的影响

1.2.6保肝作用

1.2.7抑制胆固醇的合成

1.2.8抗氧化

1.2.9抗病毒

1.2.10抑菌作用

1.2.11抗炎作用

1.2.12抑制血管紧张素转化酶(ACE)

1.2.13抑制组织胺释放

1.2.14镇痛

1.2.15酶抑制活性

1.3生产工艺

1.3.1影响灵芝三萜形成的因素

1.3.2液体发酵

1.3.3提取分离

1.3.4定性定量分析

1.4展望

1.5 MTT法在抗肿瘤药物体外筛选方法中的应用

1.6细胞凋亡与抗肿瘤药物

1.6.1细胞凋亡的定义

1.6.2细胞凋亡与抗癌药物

1.7细胞凋亡的检测方法

1.8细胞周期与抗肿瘤药物

1.8.1细胞周期与肿瘤

1.8.2细胞周期与细胞凋亡

1.8.3细胞周期与抗癌药物

1.8.4细胞周期分布的检测方法

1.9本课题的研究背景,目的和意义

参考文献

第二章灵芝总三萜含量测定的方法学研究

2.1材料和仪器

2.1.1材料

2.1.2仪器

2.1.3主要试剂

2.2方法

2.2.1灵芝酸的提取

2.2.2可行性试验

2.2.3试验条件的优化

2.2.4标准曲线的绘制

2.2.5灵芝样品的测定

2.2.6稳定性试验

2.2.7重现性试验

2.2.8加样回收率测定

2.3结果

2.3.1可行性试验结果

2.3.2最佳显色条件的确定

2.3.3标准曲线的绘制

2.3.4灵芝样品的测定

2.3.5稳定性测试

2.3.6重现性测试

2.3.7加样回收率测定

2.4讨论

2.5小结

参考文献

第三章提取分离工艺对灵芝三萜体外抑瘤活性影响的研究

3.1材料和仪器

3.1.1材料

3.1.2仪器

3.1.3主要试剂

3.2方法

3.2.1灵芝三萜类物质的提取分离

3.2.2灵芝三萜类提取物的定性检测

3.2.3抑瘤活性的测定

3.2.4细胞形态学观察

3.2.5早期凋亡细胞的定量检测

3.3结果

3.3.1灵芝三萜类提取物的定性检测

3.3.2灵芝提取物不同组分对HL-60生长的影响

3.3.3灵芝提取物不同组分对MCF-7生长的影响

3.3.4灵芝提取物不同组分诱导HL-60和MCF-7肿瘤细胞死亡方式的研究

3.3.5 Annexin V定量检测结果

3.4讨论

3.5小结

参考文献

第四章高抑瘤活性菌株的筛选

4.1材料与仪器

4.1.1材料

4.1.2仪器

4.1.3主要试剂

4.2方法

4.2.1液体发酵

4.2.2灵芝粗三萜提取

4.2.3不同灵芝菌株液体发酵菌丝体总三萜含量的比较

4.2.4不同灵芝菌株液体发酵菌丝体三萜提取物体外抑瘤率的比较

4.2.5细胞形态学观察

4.2.6细胞早期凋亡检测

4.2.7细胞周期的检测

4.3结果

4.3.1灵芝菌株对液体发酵菌丝体生物量的影响

4.3.2不同灵芝菌株液体发酵菌丝体三萜提取物得率比较

4.3.3不同灵芝菌株液体发酵菌丝体三萜提取物的总三萜含量比较

4.3.4灵芝液体发酵菌丝体三萜提取物对HL-60生长抑制的量效关系

4.3.5不同灵芝菌株液体发酵菌丝体三萜提取物对HL-60抑制作用的比较

4.3.6细胞周期的检测

4.3.7诱导细胞死亡方式的研究

4.3.8细胞凋亡的检测

4.3.9灵芝液体发酵菌丝体三萜提取物对MCF-7生长抑制的量效关系

4.3.10不同灵芝菌株液体发酵菌丝体三萜提取物对MCF-7抑制作用的比较

4.4讨论

4.5小结

参考文献

论文说明

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摘要

本课题对灵芝属5个种(赤芝G.lucidum,松杉灵芝G.tsugae,G. oerstedii,G.subamboinense,无柄灵芝G. resinaceum)共26个菌株的液体发酵菌丝体三萜进行了研究.首先分析了用香草醛-高氯酸比色方法定量测定灵芝总三萜的最优条件,确定为样品甲醇溶液在70℃水浴挥干后,与0.1mL 5%香草醛-冰醋酸,1mL高氯酸在60℃水浴条件下反应15分钟,用3.9mL的冰醋酸终止反应,547nm处进行光吸收值的测定.其次,用MTT法对乙醇提取的粗三萜(GLF)及其总三萜酸成分(GLT)和非酸性成分(GLX)的体外抑瘤效果进行检测分析.运用上述总三萜香草醛定量方法和MTT体外抑瘤效果测定方法,我们对灵芝属内5个不同种共26个菌株液体发酵菌丝体三萜提取物的总三萜含量和体外抑瘤活性进行分析.

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