冬虫夏草菌—中国被毛孢(Hirsutella sinensis)菌丝体水提物抗氧化活性研究

摘要

冬虫夏草[Cordyceps]，是我国珍贵的中药。实验表明它具有多种药理活性，能补肺益肾，调节免疫功能，抗疲劳，抗癌等，并具有抗氧化和保护氧化损伤的作用。目前，冬虫夏草的无性型菌丝体-中国被毛孢(Hirsutella sinensis)已可用人工发酵方法培养，但对人工培养获得的中国被毛孢菌丝体是否与天然冬虫夏草具有相似的化学组成和药用价值缺乏足够的研究。
　　 本研究分别用化学测定法和PC12细胞氧化损伤模型法对中国被毛孢菌丝体水提物(HSE)进行了抗氧化研究。
　　 (一)FRAP法测定了人工培养中国被毛孢菌丝体热水提取物的还原力。结果表明：1mg/mL人工培养中国被毛孢菌丝体水提物相当于211.5±8.5μmol/mL Fe2+；方法学研究显示线性相关系数R2为0.9992；重现性为3.8％；精密度平均偏差(RSD)为3.1%；回收率为105.4±5.8%；该方法在30min内结果的变异系数为3.0%。
　　 (二)DPPH·自由基清除率研究显示：在HSE为0.5mg/mL、1.0mg/mL、2.0mg/mL、3.0mg/mL、4.0mg/mL、5.0mg/mL、6.0mg/mL时，清除率分别为：6.6%±0.8%、16.1%±2.8%、31.6%±0.5%、45.9%±0.5%、60.0%±1.3%、72.0±1.4%、74.8%±1.0%。用去脱氧核糖法对HSE的·OH自由基清除率进行测定：在HSE为2.0mg/mL、4.0mg/mL、6.0mg/mL、8.0mg/mL、10.0mg/mL时，清除率分别为：27.5%±4.4%、43.6%±1.9%、50.8%±6.4%、60.9%±2.8%、64.2%±1.5%。在HSE为2.0mg/mL、4.0mg/mL、6.0mg/mL、8.0mg/mL、10.0mg/mL时，其螯合Fe2+分别为22.0%±5.1%、44.8%±7.3%、53.6%±0.6%、62.2%±0.4%、66.4%±0.2%。
　　 (三)大鼠肾上腺嗜铬细胞(PC12)氧化损伤模型研究结果显示：用H2O2(200μM)处理细胞建立模型，用MTT方法检测细胞存活率，损伤处理2h后，模型组细胞存活率为36.5%±3.8%，若提前给予HSE孵育再进行H2O2处理，则可提高细胞的存活率。当HSE浓度为5μg/mL、25μg/mL、100μg/mL时，细胞存活率分别为41.1%±4.1%(P>0.05)、45.2%±1.7%(P<0.05)和54.8%±3.3%(P<0.01)，显示出HSE对H2O2造成的氧化损伤具有保护作用。
　　 LDH活性测定结果进一步验证了HSE的氧化损伤保护作用。模型组LDH酶活性为2886±399u/mL；而HSE在5μg/mL、25μg/mL、100μg/mL时，LDH酶活性分别为3000±450u/mL(P>0.05)、2667±540u/mL(P>0.05)、2295±329u/mL(P<0.01)。
　　 HSE还可以剂量依赖的提高细胞胞浆SOD活性。H2O2模型组SOD活性39±12.1%；HSE在5μg/mL、25μg/mL、100μg/mL时，胞浆SOD活性分别为：36%±9.9%(P>0.05)、47%±17.2%(P>0.05)、63%±14.9%(P<0.05)，其中中和高浓度组的SOD活性均高于模型组。
　　 流式细胞仪检测细胞内活性氧ROS水平显示：对照组细胞平均荧光强度为70.24；模型组该值升至316.21，而用25μg/mL和100μg/mL的HSE同时处理则剂量依赖性地减少ROS荧光强度，并分别为293.96、248.59，显示一定浓度的HSE可减少ROS生成。
　　 综上所述，冬虫夏草菌菌丝体(H.sinensis)水提物具有一定的抗氧活性，其氧化损伤保护机制与上调SOD、减少ROS产生有关。