中国南海PHAKELLIA FUSCA海绵及THEONELLA SWINHOE海绵可培养共生真菌种群多样性的研究

摘要

本研究使用8种真菌分离培养基（马丁培养基、2216素培养基、高氏一号培养基、麦芽粉培养基、MYPG培养基、察氏培养基、沙堡培养基和豆芽汁培养基）对中国南海Phakellia fusca海绵及Theonella swinhoe海绵的共生真菌进行分离培养。根据18S rDNA片段序列信息对来自两种海绵的共生真菌进行了系统发育分析。 实验结果显示：8种培养基里分菌种类最多的是马丁培养基（Phakellia fusca、Theonella swinhoe海绵分别分得12、5类菌），2216素培养基和高氏一号培养基的数量次之（2216素培养基在Phakellia fusca、Theonella swinhoe海绵分别分得5、5类菌，高氏一号培养基在在Phakellia fusca、Theonella swinhoe海绵分别分得7、2类菌），而剩余的麦芽粉、MYPG、察氏、沙堡以及豆芽汁培养基在每种海绵分别分得1-3类菌。根据分离菌株的菌落形态特征初步得到111株菌，纯化培养后提取单菌DNA，并采用真菌18S rDNA片段的特异引物PCR扩增，通过Taq I、Hinf I、Hae III三种限制性内切酶对PCR产物进行ARDRA酶切分型，Phakellia fusca、Theonella swinhoe海绵可培养真菌分别分出5种及4种型，共31株独立菌。对31株菌的PCR产物测序并BLAST进行在线序列比对，从而得到这些菌株的生物学信息。 31株菌的序列分析显示，Phakellia fusca海绵可培养共生真菌中所有分离出的真菌属于子囊菌门中（Ascomycota）9目14属（外加1个未鉴定到属）和担子菌门（Basidiomycota）中1目1属，Theonella swinhoe海绵可培养共生真菌中所有分离出的真菌属于子囊菌门中（Ascomycota）3目5属（外加1个未鉴定到属）。Phakellia fusca海绵分离出的共生真菌比例最高的目为Eurotiales(n=8,34.8％)（n为分出菌的种类数），比例最高的属为Aspergillus（n=5,21.7％），Theonella swinhoe海绵分离出的共生真菌优势目为Eurotiales(n=5,62.5％)，比例最高的属为Aspergillus和Penicillium（均为n=2,25％）。Theonella swinhoe海绵分离出的共生真菌所属于的3目5属（外加1个未鉴定到属）在Phakellia fusca海绵分离出的共生真菌中均能找到。 本研究确定了中国南海Phakellia fusca及Theonella swinhoe海绵的最佳真菌分离培养基是马丁培养基。本研究可以对海绵共生真菌的分离培养和海绵可培养共生真菌种群多样性的研究提供参考。