电脉冲介导表达EGFRvⅢDNA免疫预防小鼠颅内肿瘤研究

摘要

编码肿瘤特异性抗原蛋白的DNA疫苗不仅能诱导机体产生特异性抗肿瘤的CD8+ T细胞的免疫应答,而且还能诱导机体产生体液免疫,从而显示出抗肿瘤免疫的优势。对于颅内肿瘤来说编码肿瘤特异性抗原蛋白的DNA免疫不仅可以减少自身免疫的风险,还能精确地消除表达特异性抗原的肿瘤细胞。然而,裸DNA的免疫诱导能力极差,需要借助其他的载体或物理输送方法来提高其免疫效果。电脉冲是目前最为有效的质粒DNA物理输送方法,而且还能提高DNA疫苗的免疫应答效果。
　　肿瘤特异性抗原蛋白,表皮生长因子受体突变体Ⅲ(EGFRvⅢ)是脑胶质瘤最常见的突变体抗原之一。本文中以EGFRvIII为抗原蛋白构建DNA疫苗,并利用电脉冲介导DNA疫苗免疫小鼠,验证该DNA疫苗的免疫诱导能力及抑制EGFRvIII阳性肿瘤细胞在颅内成瘤和生长的效果。我们首先克隆并构建了EGFRvIII的表达质粒;经脂质体转染B16F10细胞后筛选稳定表达该蛋白的细胞株(B16F10-EGFRvIII),并用蛋白印迹及细胞免疫化学方法进行验证;将DNA疫苗用电脉冲方法免疫小鼠并用CTL检测DNA疫苗的免疫效果;免疫小鼠皮下和颅内接种肿瘤细胞,验证电脉冲DNA免疫对肿瘤形成和生长的抑制效果。
　　研究结果表明我们构建的重组质粒能高效表达EGFRvIII;筛选所得稳转细胞株,EGFRvIII能正确的表达和定位;与未免疫组相比,电脉冲介导DNA疫苗免疫能诱导更显著的细胞免疫应答(p<0.05),并显示对皮下和颅内肿瘤的形成和生长有明显的抑制效果(s.c., p=0.002,i.c., p=0.02)。因此,电脉冲介导EGFRvIII DNA免疫有望用于颅内肿瘤的免疫治疗,并显著的抑制颅内肿瘤的生长。

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第一章 绪论

1.1引言

1.2 DNA疫苗

1.3表皮生长因子受体突变体Ⅲ

1.4电脉冲介导DNA疫苗的运输

1.5本文的研究目标和研究内容

1.6本研究创新性

第二章 制备及稳转细胞株的建立

2.1前言

2.2材料与方法

2.3结果

2.4本章小结

第三章 电脉冲介导EGFRvⅢ DNA疫苗的小鼠免疫及对肿瘤的预防研究

3.1前言

3.2材料与方法

3.3结果

3.4讨论

3.5本章小结

第四章 全文小结及展望

4.1全文小结

4.2展望

参 考 文 献

附录1 中英文缩写字母表

致谢

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