A20在肝纤维化中的表达及其作用机制研究

摘要

第一部分、A20在肝硬化患者肝脏组织中表达增加
　　目的：探讨肝硬化肝脏组织标本中 A20蛋白表达有无变化。
　　方法：取临床诊断为肝硬化病人的肝脏组织（n=7）和正常对照组（n=4），免疫组化检测两组中蛋白A20的表达水平。
　　结果：A20在人肝纤维化的肝脏中表达增高（P＜0.01），其中，肝星状细胞细胞和肝细胞为阳性。
　　结论：A20在肝硬化患者的肝脏组织中表达增加。
　　第二部分、A20在小鼠肝纤维化模型肝脏组织中表达增加
　　目的：探讨小鼠肝纤维化模型中肝脏组织中 A20水平表达有无变化。
　　方法：通过DDC饮食、MCD饮食及胆总管结扎（BDL）手术构建小鼠肝脏纤维化模型，通过免疫印迹法及PCR分别检测3种模型中肝脏组织A20表达水平。
　　结果：在3种小鼠肝纤维化模型中，A20在蛋白水平及mRNA水平表达均增高，MCD饮食喂养处理、DDC饮食喂养处理及行BDL手术及的小鼠mRNA水平实验组对照组分别升高约1.5倍、4.7倍、17.7倍。
　　结论：A20在小鼠肝纤维化模型的肝脏组织中表达增加。
　　第三部分、A20在内毒素诱导的体外肝纤维化模型中的变化
　　目的：探讨A20在内毒素（LPS）诱导的LX-2细胞体外肝纤维化模型中的变化及其作用机制。
　　方法:用不同浓度LPS（0,0.001,0.01,0.1,1μg/mL）刺激LX-2细胞6小时以及用0.1μg/mL的内毒素（LPS）刺激LX-2细胞不同时间（0、6、12、24小时），免疫印迹法及PCR检测A20蛋白表达水平，PCR检测不同炎症因子(IL-6，MCP-1和TGF-β)的mRNA水平。
　　结果：A20蛋白水平可随着LPS刺激LX-2细胞的浓度不同及刺激时间不同而发生变化。随着LPS刺激LX-2细胞时间延长，TLR4、IL-6，MCP-1和TGF-βmRNA水平增加。
　　结论：使用LPS刺激LX-2细胞的不同条件下，A20的表达量具有浓度依赖性并随刺激时间变化而变化；并且炎症因子的表达量随刺激时间的延长而升高。
　　第四部分、过表达A20可改善LX-2细胞体外肝纤维化模型中的纤维化程度及抑制炎症因子
　　目的：探讨过表达A20对LX-2细胞体外肝纤维化模型的影响及其作用机制。
　　方法：通过A20过表达腺病毒感染LX-2细胞，用0.1μg/mL LPS刺激LX-2细胞24小时后，进行免疫印迹检测α-SMA蛋白的变化，通过PCR检测TLR4、IL-6、MCP-1、TGF-β及α-SMA、col-1、col-3的变化。
　　结果：过表达A20后，LX-2中α-SMA蛋白表达量明显降低，实验组α-SMA、col-1、col-3的mRNA水平较NC组均降低，分别为0.44、0.47、0.67。TLR4及IL-6，MCP-1和TGF-β水平降低，分别为对照组的0.55、0.53、0.41、0.42。
　　结论： A20可以抑制LX-2细胞中α-SMA及col-1、col-3的表达，可能与抑制LX-2细胞的TLR4及IL-6，MCP-1和TGF-β炎症因子表达有关。

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引言

第一章 A20在肝硬化患者肝脏组织中表达增加

1.1材料与方法

1.2 结果

1.3 讨论

第二章 A20在肝纤维化动物模型中肝脏组织中表达增加

2.1材料与方法

2.2 结果

2.3 讨论

第三章 A20在内毒素诱导的体外肝纤维化模型中的变化

3.1材料与方法

3.2结果

3.3 讨论

第四章 过表达A20可改善LX-2细胞体外肝纤维化模型中

4.1材料与方法

4.2结果

4.3 讨论

全文总结

参考文献

附录 综述：A20抗炎作用在肝脏保护的作用机制研究进展

致谢

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