匹罗卡品致大鼠癫痫持续状态后海马Puma和CytC的表达变化

摘要

目的：癫痫是一种常见病，流行病学调查显示其发病率为5‰~7‰。癫痫发作不仅可引起脑部神经元的坏死或病理性凋亡及神经生物学改变，而且还常引起患者及家属严重的心理障碍。癫痫持续状态（Status epilepticus，SE）是神经科临床常见的危急重症，常常导致大脑易损区海马组织的损伤，若得不到及时的缓解和治疗，死亡率很高。研究发现Bcl-2蛋白家族中仅具有BH3结构域的P53上调细胞凋亡调控因子Puma（P53 up-regulated modulator of apoptosis，Puma）蛋白在细胞凋亡途径中发挥了重要的作用。而CytC在线粒体外膜渗透性增加的情况下可以释放出来，参与内源性线粒体凋亡途径。Puma和CytC对SE后海马神经元的损伤机制研究较少，本实验采用匹罗卡品制作SE大鼠动物模型，探讨 SE后24小时CytC和Puma在海马组织中的表达情况。
　　方法：成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠62只，随机分成实验组（n=54）和对照组（n=8）。实验组先应用硫酸阿托品以拮抗匹罗卡品的外周胆碱能效应，随后通过匹罗卡品腹腔注射制造癫痫模型，根据大鼠是否发生SE将其分为癫痫持续状态组（SE组）和非癫痫持续状态组（非SE组）。24小时后取大鼠海马组织，HE染色观察海马CA1区神经元的数量，TUNEL染色观察海马神经元的损伤情况。采用Western blot方法测定海马组织中Puma的表达，免疫组织化学方法检测海马组织中CytC的含量。运用Pearson相关分析法分析Puma和CytC表达的相关性。对照组除匹罗卡品用生理盐水代替外，其余所有操作步骤与实验组相同。
　　结果：54只实验组大鼠中未诱导出SE的有12只，归入非SE组。成功诱导出SE的有42只，成功率为77.8％。42只SE大鼠中24h之内死亡14只，死亡率为33.3%，入SE组28只。对照组和非SE组24小时内均未死亡。SE组大鼠海马CA1区HE染色神经元数量（54.75±3.37）与对照组（103.75±2.12）和非SE组（100.67±2.19）相比，显著减少（p<0.05）。SE组TUNEL阳性神经元数目（25.14±2.77）与对照组（3.25±2.19）和非SE组（3.33±2.02）相比明显增加（p<0.05）。而且可见SE组海马组织CytC阳性神经元的含量（14.11±2.38）较对照组（2.88±2.70）和非SE组（4.42±2.19）明显增多（p<0.05）。并可见SE组海马组织Puma蛋白的表达（0.439±0.038）较对照组（0.016±0.003）和非SE组（0.249±0.034）明显增多（p<0.05）。相关性分析显示SE组Puma蛋白的表达和Tunel染色阳性神经元细胞含量之间存在着相关关系（r=0.891,p<0.01）；而且，SE组Puma和CytC的含量变化具有相关性（r=0.895，P<0.01）。
　　结论：大鼠SE后24h海马神经元出现凋亡，而且Puma蛋白的表达和Tunel染色阳性神经元细胞含量之间存在着正相关关系。Puma和CytC在SE大鼠海马组织神经元中的表达含量增加，两者的表达水平成正相关。

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中英文对照

第一章： 绪 论

第二章：材料与方法

2.1实验材料

2.2实验方法

2.3 统计学分析方法

第三章：结 果

3.1造模后各组大鼠的行为表现

3.2 大鼠癫痫模型的结果分析

3.3 HE染色结果分析

3.4 TUNEL染色结果分析

3.5 免疫组织化学染色结果分析

3.6 western blot实验结果分析

3.7 直线回归与线性相关结果分析

第四章：讨 论

4.1 癫痫和癫痫动物模型

4.2 Bcl-2蛋白家族和癫痫

4.3 CytC和癫痫

4.4 Puma和CytC的相互作用和关系

第五章：结论和展望

5.1结论

5.2 展望

参考文献

致谢

攻读硕士期间公开发表的论文和著作