匹罗卡品致痫大鼠海马GABA能中间神经元SS及PVmRNA表达变化的研究

摘要

背景与目的： 颞叶癫痫是临床最常见的难治性癫痫之一，迄今为止其发病机制仍不明确。海马兴奋性回路的增强和抑制性回路的减弱在颞叶癫痫发生中起着极为重要的作用。研究认为兴奋性回路的建立虽然参与了颞叶癫痫的发生，但并不足以解释自发性痫性发作的原因。于是与海马抑制性回路密切相关的GABA能中间神经元逐渐成为目前的研究热点。研究认为，GABA能中间神经元数目的变化可能是GABA能抑制改变的主要原因。本课题组前期研究行免疫组化发现，匹罗卡品致痫大鼠海马树突型GABA能中间神经元SS阳性神经元和胞周型GABA能中间神经元PV阳性神经元数目变化明显，但其变化与mRNA表达水平是否相关尚不清楚。且目前关于中间神经元基因表达变化与癫痫的研究主要集中于海人酸模型和电刺激模型中，在匹罗卡品模型中的极少。基于此，本实验拟建立匹罗卡品致痫模型，在不同时间点观察致痫大鼠海马各区GABA能中间神经元中SS及PVmRNA表达变化，从基因水平探讨SS、PV阳性中间神经元在颞叶癫痫的发生发展中所起的重要作用。 方法： 1、模型制作与分组：6～8周龄健康雄性SD大鼠96只随机分为实验组（A组，n=64只）和对照组（B组，n=32只），两组又随机分为8个亚组（A1～8亚组，n=8，B1～8亚组，n=4）。A组颞叶癫痫模型制作采用氯化锂加匹罗卡品腹腔注射法；B组大鼠腹腔注射等量无菌生理盐水。根据Racine标准判断癫痫发作的程度。选取痫性发作后2小时、6小时、1天、3天、7天、15天、30天、60天为研究时间点，海马CA1区、CA3区、齿状回为研究部位。 2、不同时间点行尼氏染色观察海马病理改变。 3、原位杂交方法检测各时间点海马不同区域表达SS及PVmRNA的中间神经元数目变化。 结果： 1、实验组大鼠腹腔注射氯化锂--匹罗卡品后，SE诱发成功率为87.5％，死亡率为17.19％。 2、尼氏染色结果显示：实验组海马神经元缺失以SE后3～7天和60天最为明显。CA区域锥体细胞和门区神经元均显著减少（p<0.01），齿状回颗粒细胞缺失相对较轻（p<0.05）。 3、实验组大鼠海马各区表达SSmRNA的中间神经元数目均在SE后3天减至最低（p<0.01），随后开始恢复，SE后60天时CA3区表达SSmRNA的中间神经元数目超过对照组（p<0.05），但门区（p<0.01）和CA1区（p<0.05）仍低于对照水平。 4、实验组大鼠海马门区表达PVmRNA的中间神经元数目在SE后下降，60天时降至最低（p<0.01）；海马CA1区表达PVmRNA的中间神经元数目在SE后3天降至最低（p<0.01），随后恢复，但仍低于正常水平（p<0.05）；海马CA3区表达PVmRNA的中间神经元数目在SE后早期无明显变化（p>0.05），7天时开始增多，60天时超过对照水平（p<0.01）。 结论： 1、抑制性GABA能中间神经元中SS、PVmRNA的下调可能在颞叶癫痫发生中起重要作用。 2、慢性期抑制性GABA能中间神经元中SS、PVmRNA的恢复或上调可能与颞叶癫痫的发展或修复有关。 3、GABA能中间神经元数目变化部分由于其标志物mRNA水平的调节，但这并不是神经元数目变化的唯一因素。

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文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

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第一章前言

第二章材料与方法

第三章结果

第四章讨论

第五章结论

参考文献

综述 生长抑素中间神经元与癫痫

致谢