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目录
前言
实验材料与方法
1. 实验材料
1.1 质粒和细胞株
1.2 主要试剂
1.3 主要耗材
1.4 实验动物
2. 实验方法
2.1 构建稳转细胞株
2.2 细胞在固相化纤维蛋白原上的黏附及伸展试验
2.3 蛋白免疫共沉淀(Co-IP)检测稳转细胞株胞内的蛋白质相互作用
2.4 纯合子小鼠繁殖与鉴定
2.5 逆转录病毒的获得
2.6 小鼠造血干细胞移植
2.7 流式细胞仪检测转基因小鼠血小板的β3及GFP的表达
2.8 转基因血小板的功能分析
2.9 统计学分析
实验结果
1.稳转细胞株的建立
1.1β3突变型(β3?N ITY)真核表达载体的构建
1.2流式细胞术检测稳转细胞株中αIIb和β3的表达
1.3免疫印迹法检测蛋白的表达
2.细胞在固相化纤维蛋白原上的黏附及伸展情况
3. C o-IP检测稳转细胞株胞内的蛋白质相互作用
3.1 Co-IP检测β3与kindlin蛋白之间的相互作用
3.2 Co-IP检测β3与src之间的相互作用
4.逆转录病毒感染的造血干细胞移植方法的评估
5.纯合子小鼠的基因型鉴定
6.空载、野生型及突变型整合素β3逆转录病毒的获得
6.1逆转录病毒载体的测序鉴定
6.2 逆转录病毒包装
6.3逆转录病毒感染效率测定
7.转基因小鼠血小板的β3及GFP的表达
8. 转基因小鼠血小板与游离纤维蛋白原的结合
9.转基因小鼠血小板在固相化纤维蛋白原上的伸展
讨论
结论
参考文献
致谢
附录