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第一章 引言
1.1 miRNA
1.1.1miRNA概述
1.1.2miRNA的作用机制
1.1.3 miRNA研究方法
1.2 miRNA在斑马鱼中的研究
1.2.1miRNA在斑马鱼早期胚胎发育中的研究
1.2.2miRNA在斑马鱼其他组织发育中的研究
1.3 miR-202的研究现状
1.3.1 miR-202在哺乳动物中的研究
1.3.2miR-202在脊椎动物中的研究
1.4 CRISPR/Cas9系统
1.4.1CRISPR/Cas9系统概述
1.4.2CRISPR/Cas9系统的应用研究进展
1.5 本研究的主要内容和意义
第二章 材料与方法
2.1 引言
2.2 实验材料
2.3 仪器和试剂
2.3.1实验仪器
2.3.2所用各种试剂、试剂盒及缓冲液
2.4 方法和步骤
2.4.1生物信息学方法
2.4.2斑马鱼受精卵显微注射
2.4.3miR-202反义核苷酸抑制及挽救
2.4.4miRNA分离和实时荧光定量PCR（qRT-PCR）
2.4.5CRISPR/Cas9系统敲除miR-202
2.4.6 斑马鱼胚胎整体原位杂交
第三章 结果与讨论
3.1 斑马鱼早期胚胎发育过程中miR-202的表达量变化
3.1.1利用qRT-PCR检测各时期miR-202的表达量变化
3.1.2 利用整体原位杂交检测斑马鱼各个时期miR-202的表达
3.2 利用反义核苷酸抑制斑马鱼受精卵miR-202
3.3 斑马鱼受精卵中过表达miR-202
3.4 斑马鱼胚胎挽救实验
3.5 CRISPR/Cas9系统定点突变斑马鱼miR-202
3.6 CRISPR/Cas9系统片段敲除斑马鱼miR-202
3.6.1获得TS1、TS2、TS3靶点的sgRNA
3.6.2 检测各靶点的有效性
3.6.3 检测并筛选F0代杂合突变体
3.6.4检测F1代胚胎发育
3.6.5 检测F2代纯合突变体及表型
3.6.6利用斑马鱼整体原位杂交检测miR-202表达量变化
3.7 讨论
参考文献
致谢
