利用毕赤酵母系统表达重组蛋白

摘要

毕赤酵母表达系统是目前最为成功的外源蛋白表达系统之一。该系统操控简单、经济，表达量高，具有翻译后修饰的能力，不存在原核表达系统内毒素难以去除的问题，也不存在哺乳动物细胞表达系统的病毒和支原体污染问题。目前已有多种外源蛋白在该系统中成功表达。我们利用该系统表达了几种重组蛋白。 1.复合干扰素突变体根据毕赤酵母密码子偏性合成了复合干扰素突变体基因，构建了分泌型酵母表达载体，线性化后转化GS115。在发酵罐中进行了高密度发酵，表达量为112mg/L，发酵上清经超滤、三步层析纯化获得纯度大于98％的重组蛋白，比活性大于6×108IU/mg。 2.人干扰素-β1a合成了人IFN-β1a基因，构建了酵母表达载体，线性化后转化GS115。甲醇诱导转化子，细胞病变抑制法测定诱导上清的抗病毒活性，培养上清中的表达量为2×105IU/mL。 3.组织型纤溶酶原激活剂衍生物rPAm构建了rPAm的酵母表达载体，并在毕赤酵母分泌表达，培养上清中的表达量为1.6mg/L。 4.Thr6-PDGF-BB构建了Thr6-PDGF-BB的酵母表达载体，筛选了高表达克隆，并在发酵罐中进行了高密度发酵，表达量为320mg/L。探索并优化了纯化工艺，获得纯度大于99％的重组Thr6-PDGF-BB。

目录

第一部分复合干扰素突变体在毕赤酵母中的表达及纯化

引言

1材料与方法

2结果

3 讨论

参考文献

第二部分重组人干扰素-β在毕赤酵母中的分泌表达

引言

1材料与方法

2结果

3 讨论

参考文献

第三部分重组人组织型纤溶酶原激活剂衍生物rPAm在毕赤酵母中的表达

引言

1材料与方法

2结果

3 讨论

参考文献

第四部分Thr6-PDGF-BB在毕赤酵母中的表达及纯化

引言

1材料与方法

2结果

3讨论

参考文献

总 结

综述 利用毕赤酵母表达重组蛋白的研究进展

致 谢