脂质、P-gp抑制剂及自微乳化释药系统对紫杉醇肠淋巴转运的影响研究

摘要

紫杉醇(Paclitaxel，PTX)是对多种类型肿瘤细胞都具有重要药理活性的抗肿瘤药物，广泛用于卵巢癌、乳腺癌、非小细胞肺癌、结肠癌、头颈癌、淋巴瘤以及由艾滋病引起的卡波西氏肉瘤等的治疗。紫杉醇的水溶性极低，现临床应用的紫杉醇主要为紫杉醇注射液(商品名为泰素，Taxol)，它由聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor EL)和无水乙醇(1∶1，v/v)配制而成。但是处方中的辅助溶剂，聚氧乙烯蓖麻油，静脉注射时易引起严重的过敏反应，从而限制其应用。因此，大量的研究都致力于紫杉醇的口服制剂的研发以减少静脉注射引起的不良反应。但是，由于紫杉醇水溶性差，同时又是CYP3A4和P-gp的底物，致使其口服时生物利用度很低。紫杉醇脂质处方可以改善紫杉醇的口服生物利用度。脂质处方改善紫杉醇口服生物利用度的机制包括增加药物在胃肠道的溶解度，以及提高紫杉醇的肠淋巴转运。但目前尚未见紫杉醇的肠淋巴转运的相关报道。本研究分为三个部分：
　　第一部分：建立大鼠血浆和淋巴中紫杉醇检测的高效液相色谱方法，并对方法进行验证。血浆和淋巴以地西泮为内标，经乙腈沉淀，以Waters Symmetry(R)C18(150×4.6 mm，5μm)为色谱柱;流动相为乙腈-水溶液(48∶52，v/v)，流速为1mL· min-1;柱温为30℃，检测波长为227 nm。血浆和淋巴样品的进样体积分别为50μL和20μL。淋巴中紫杉醇浓度在0.05～10μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9996)。最低定量限为0.05μg·mL-1。低（0.05μg·mL-1）、中(0.5μg·mL-1)、高(5μg·mL-1)3个浓度的绝对回收率分别为（78.1土4.65）％、（86.1±9.56）％、（85.2±5.19）％;日内和日间RSD均小于15％。血浆中紫杉醇浓度在0.02～5μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9999)。最低定量限为0.02μg·mL-1。低(0.05μg·mL-1)、中(0.5μg·mL-1)、高（2μg·mL-1）3个浓度的绝对回收率分别为(77.3±5.61)％、（77.0±2.33）％、（83.1±5.79）％;日内日间精密度RSD均小于10％。该方法准确、灵敏、快速、简便，可适用于紫杉醇在大鼠体内的药动学研究。
　　第二部分：建立麻醉大鼠肠系膜淋巴管、右颈静脉、十二指肠三插管模型，十二指肠分别给予20 mg·kg-1紫杉醇溶液、紫杉醇溶液经P-gp抑制剂维拉帕米预处理、紫杉醇溶液剂与单甘油酯/亚油酸混合物合用、紫杉醇溶液剂经P-gp抑制剂维拉帕米预处理与单甘油酯/亚油酸混合物合用，收集淋巴液和血浆样品进行HPLC测定。结果表明，紫杉醇溶液的累积肠淋巴转运率为（0.038±0.003）％，紫杉醇存在肠淋巴转运现象。紫杉醇溶液与单甘油酯/亚油酸混合物一起服用可使肠淋巴转运程度增加，但是两者血浆中的AUC、Cmax并无显著差异。紫杉醇溶液经维拉帕米预处理，其累积肠淋巴转运率为（0.136±0.022）％，同时绝对生物利用度与对照组相比提高了1.8倍。紫杉醇溶液剂经维拉帕米预处理并和单甘油酯/亚油酸混合物一起服用可使紫杉醇的累积肠淋巴转运率达到(0.245±0.027)％，与对照组相比提高了6.5倍，绝对生物利用度提高了1.8倍。因此，脂质可增加紫杉醇的肠淋巴转运程度，P-gp抑制剂可以同时提高紫杉醇的肠淋巴转运程度以及生物利用度。
　　第三部分：制备紫杉醇自微乳化药物传递系统，对其在大鼠体内的肠淋巴转运程度进行考察，并与紫杉醇溶液剂进行对比。采用伪三元相图，筛选并优化紫杉醇自微乳化药物传递系统的处方。建立麻醉大鼠肠系膜淋巴管、右颈静脉、十二指肠三插管模型，十二指肠给予20 mg· kg-1紫杉醇自微乳制剂，收集淋巴和血浆样品用以测定。紫杉醇自微乳制剂的累积肠淋巴转运率为(0.151±0.022)％，较紫杉醇溶液组有显著提高。另外紫杉醇自微乳制剂的Cmax和AUC均高于溶液剂，生物利用度提高。因此紫杉醇自微乳制剂可用于提高紫杉醇的肠淋巴转运程度及生物利用度。研究结果有助于阐明口服紫杉醇的肠道吸收转运规律、紫杉醇脂质给药系统口服肠淋巴转运的特点及新型制剂的研发提供实验依据。

目录

声明

缩写字母表

摘要

前言

第一部分 HPLC法测定大鼠血浆和淋巴中紫杉醇浓度的方法学研究

1 引言

2 实验材料

2．1 仪器

2．2 药品与试剂

3 实验方法

3．1 色谱条件

3．2 对照品储备液及内标液配制

3．3 生物样品预处理

3．4 标准曲线的建立

3．5 提取回收率及精密度试验

3．6 样品稳定性考察

3．7 质控样品

4 实验结果

4．1 方法专属性

4．2 标准曲线

4．3 提取回收率和精密度

5 讨论

6 小结

7 附图及附表

第二部分 紫杉醇肠淋巴转运的研究及油、P-gp抑制剂对其肠淋巴转运程度的影响

1 引言

2 实验材料

2．1 仪器

2．2 药品与试剂

2．3 实验动物

3 实验方法

3．1 动物实验

3．2 紫杉醇溶液剂的制备

3．3 给药方案

3．4 样品采集

3．5 淋巴与血浆中紫杉醇含量的测定

3．6 甘油三酯分析

3．7 数据处理与统计分析

4 结果

4．1 紫杉醇肠淋巴转运程度

4．2 肠淋巴转运甘油三酯

4．3 药动学研究

5 讨论

6 小结

7 附图及附表

第三部分 紫杉醇自微乳制剂肠淋巴转运的研究

1 引言

2 实验材料

2．1 仪器

2．2 药品与试剂

2．3 实验动物

3 实验方法

3．1 紫杉醇-SMEDDS制剂处方优化

3．2 紫杉醇自微乳制剂肠淋巴转运研究

4 结果与讨论

4．1 紫杉醇-SMEDDS处方研究

4．2 紫杉醇肠淋巴转运的研究

4．3 药动学结果

5 小结

6 附图及附表

全文总结

参考文献

综述 药物肠淋巴转运的研究进展

致谢

攻读学位期间发表的文章及所获的奖励