载多西紫杉醇脂质微泡联合超声靶向微泡破裂对兔VX2舌癌颈部淋巴转移瘤作用的初步研究

摘要

舌癌是口腔颌面部好发率最高的恶性肿瘤[1]，以鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma，SCC)最为常见。因舌部的血供十分丰富、活动性极强等原因，在舌癌早期就容易发生颈部淋巴结的转移;其预后明显受影响，并影响肿瘤的分期、临床治疗的方案[2]。据研究表明:头颈部的SCC患者颈部淋巴结的状态可以作为评价治疗后效果及评估预后状态重要的指标，统计发现凡是出现颈部淋巴结转移的患者，其治愈率降低约可达到50％[3]。长期以来对于舌癌治疗的手段主要是行原发灶的手术切除及颈部淋巴结清扫，视情况辅以化疗、放疗等，但仍有诸多不如意之处，例如:术中难以清除淋巴微转移灶、切除率较低，术后常导致畸形的面颈部严重、疾病的复发性较高等;而在放疗与化疗的过程中常因为缺乏对肿瘤细胞及周围正常细胞的靶向性，在治疗的同时会给身体带来很大的毒性及副作用。因此，对于舌癌颈部淋巴转移瘤的有效治疗研究显得尤其重要和迫切。近年来，癌瘤淋巴靶向治疗（Lymphatic targeted therapy, LTT）研究给舌癌颈部淋巴转移瘤的处理带来了新的方向，LTT研究主要是寻找靶向性好、疗效高、毒副作用小的淋巴靶向制剂[4]。同时，载药超声微泡(Ultrasound microbubbles，UM)联合超声靶向微泡破裂(Ultrasound targeted microbubblesdestruction，UTMD)技术，作为一种新的肿瘤治疗手段逐渐受到关注，越来越多的国内外研究者将其应用到各种恶性肿瘤的治疗研究中[5]。
　　多西紫杉醇(Docetaxel，Doc)是一种常用的口腔颌面部治疗效果较好的化疗药物。因Doc自身溶水性较差，在临床应用中常常容易发生过敏、溶血等等不良反应，这为临床的使用带来极大的不便与限制。研究发现，将Doc载入脂质后可以明显的降低它本身的毒性，同时可保持其本身具有的抗肿瘤的活性。国内外研究者已经将Doc运用到对多种恶性肿瘤的治疗研究。康娟等研究者将载多西紫杉醇脂质超声微泡(Docetaxel-loaded lipid microbubbles，DLLM)用于肝癌原发灶的治疗研究，实验证明了DLLM联合UTMD可明显抑制肝癌新生血管及转移相关因子的表达[6]。
　　本课题的研究通过前期成功建立兔VX2舌癌颈部淋巴转移瘤模型[7]及成功制备DLLM[8]的基础上，应用UTMD使载药微泡在靶组织处破裂后持续缓慢的释放出药物，在体内探讨DLLM联合UTMD对兔VX2舌癌颈部淋巴转移瘤的作用。本实验发现了载药微泡联合UTMD这种LTT对舌癌颈部淋巴转移瘤的治疗具有一定的前景与使用价值，同时为恶性肿瘤淋巴转移的治疗提供了一种新思路。本次研究分为以下两个方面:
　　第一部分载多西紫杉醇脂质微泡联合超声靶向微泡破裂对兔VX2舌癌颈部淋巴转移瘤中肿瘤细胞增殖和凋亡作用的研究
　　目的:初步探讨DLLM联合UTMD对兔VX2舌癌颈部淋巴转移瘤中肿瘤细胞的影响。方法:成功建立30只兔VX2舌癌颈部淋巴转移瘤模型，随机平均分为A组、B组、C组、D组、E组、F组(n=5);给予各组不同的药物注射及处理方法。治疗前后在超声测量各组动物颈部淋巴转移瘤大小，分别计算瘤体的体积和各动物颈部淋巴转移瘤的抑瘤率(Tumor inhibition rate，TIR); TUNEL法检测各组动物颈部淋巴转移瘤中肿瘤细胞凋亡情况、免疫组化法(Immunohistochemicalmethod，IHC)检测各组动物颈部淋巴转移瘤中肿瘤细胞PCNA的表达情况。结果:在一定强度的超声作用下，E组实验动物颈部淋巴转移瘤的TIR高于其他组(P＜0.05)，与其他各组相比差异有统计学意义;E组动物颈部淋巴转移瘤中肿瘤细胞的凋亡指数(Apoptotic index，AI)明显高于其他各组（均P＜0.01）;同时，E组动物颈部淋巴转移瘤中的肿瘤细胞增殖明显受到抑制，增殖指数(Proliferating index，PI)明显低于其他各组（均P＜0.01）。结论:DLLM联合UTMD能促进兔VX2舌癌颈部淋巴转移瘤中肿瘤细胞本身的凋亡、延缓其增殖，并能在宏观表现上显著抑制兔VX2舌癌颈部淋巴转移瘤的体积生长。
　　第二部分载多西紫杉醇脂质微泡联合超声靶向微泡破裂对兔VX2舌癌颈部淋巴转移瘤微血管生长及肿瘤转移相关作用的研究
　　目的:初步探讨DLLM联合UTMD对兔VX2舌癌颈部淋巴转移瘤中微血管的生长及肿瘤转移相关作用的研究。方法:成功建立30只兔VX2舌癌颈部淋巴转移瘤模型，随机平均分为A组、B组、C组、D组、E组、F组(n=5），给予各组不同的药物注射及处理方法。比较各组动物颈部淋巴转移瘤组织中CD34、微血管密度(Microvesseldensity, MVD)、血管内皮生长因子(Vascular endothelial growthfactor, VEGF)、基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2，MMP2)的表达。结果:E组实验动物颈部淋巴转移瘤中CD34表达水平最低，MVD计数结果显示E组的表达水平显著低于其他各组(P＜0.01)与其他各组相比差异有统计学意义;E组实验动物颈部淋巴转移瘤中VEGF、MMP2表达水平均为最低，与其他各组相比差异有统计学意义(P＜0.01)。结论:DLLM联合UTMD不仅能抑制兔VX2舌癌颈部淋巴转移瘤的微血管形成，更能一定程度上从分子生物学水平明显抑制兔VX2舌癌颈部淋巴转移瘤的转移及生长。

目录

声明

英汉缩略语对照

摘要

前言

第一部分 载多西紫杉醇脂质微泡联合超声靶向微泡破裂对兔VX2舌癌颈部淋巴转移瘤中肿瘤细胞增殖和凋亡作用的研究

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

第二部分 载多西紫杉醇脂质徽泡联合超声靶向微泡破裂对兔VX2舌癌颈部淋巴转移瘤微血管生长及肿瘤转移相关作用的研究

1 材料与方法

2 结果

3．讨论

全文总结

参考文献

附图

文献综述 超声微泡对基于兔舌VX2肿瘤的治疗初探

致谢

攻读硕士期间发表的论文