多瘤病毒感染与妇科肿瘤相关性的初步研究

摘要

目的：多瘤病毒JCV及BKV为最早发现的感染人类的多瘤病毒。近年来，流行病学调查数据显示多瘤病毒JCV及BKV在人群中流行广泛。最近研究显示多瘤病毒JCV及BKV感染能导致神经系统、泌尿生殖系统及消化系统肿瘤发生。女性生殖系统肿瘤发病率很高，但多瘤病毒慢性感染和女性生殖系统肿瘤的关系尚未见报道，本课题的研究目的是探究多瘤病毒JCV及BKV感染与子宫肌瘤、子宫颈癌、子宫内膜癌及卵巢上皮性癌的发生之间的相关性。
　　方法：第一，多瘤病毒核酸检测方法的确立。多瘤病毒的血清学及分子诊断尚无现成商业化方法，由于多瘤病毒在核酸水平存在超过70％的同源性，决定着多瘤病毒蛋白成分的高度相似性，因此区别检测多瘤病毒感染后机体特异抗体或者多瘤病毒抗原难度很高。同时，多瘤病毒的自然史还不清楚，是否造成病毒血症有待确认。本研究运用大数据病毒序列分析，得到了五对能鉴别检测JCV、BKV及SV40的候选引物，通过阳性标准品、多瘤病毒核酸检测考核盘及临床样本对多瘤病毒核酸检测策略实施多重评测并确立多瘤病毒核酸检测体系。第二，多瘤病毒检测样本的确立。本研究平行比对个体血样、尿样及活检样本中多瘤病毒核酸检出特点，确立尿样为最佳检测样本。第三，人群样本采集。本研究收集正常对照人群（100例）的血样及尿样；收集子宫肌瘤（98例）、子宫颈癌（84例）、子宫内膜癌（40例）及卵巢上皮性癌（72例）血样、尿样及活检样本，对这些样本实施多瘤病毒核酸检测。第四，明确已知妇科肿瘤相关病毒（高危型人乳头瘤病毒、单纯疱疹病毒2型、巨细胞病毒及人类疱疹病毒4型）与多瘤病毒在本研究人群中的感染特点以及是否跟多瘤病毒存在协同效应。
　　结果：多瘤病毒JCV、BKV及SV40核酸检测方法显示很好的敏感性和特异性，在本研究人群的所有血样、尿样中均未检测出多瘤病毒SV40核酸。正常对照人群及四种妇科肿瘤人群尿样、血样和活检样本中多瘤病毒BKV核酸检出率分别为48.6%~52.5%、23.8%~26.4%和23.8%~27.8%，尿样中的检出率明显高于血样及活检样本检出率，且检出率在各患者组中无显著差异。正常对照人群及四种妇科肿瘤人群尿样、血样和活检样本中多瘤病毒JCV核酸检出率分别为49.0%~63.5%、0%~1%和0%~1%，血样及活检样本几乎检测不到，而尿样中的检出率很高，在子宫肌瘤、子宫颈癌、子宫内膜癌和卵巢上皮性癌患者尿样中的检出率分别为65.3%、51.2%、55.0%和51.4%。JCV在子宫肌瘤患者组中的检出率显著高于其它妇科肿瘤组，而其它患者组中的检出率接近普通人群水平。子宫颈癌、子宫内膜癌和卵巢上皮性癌患者合并（N=196，平均阳性率为52.0%）为对照组卡方检验显示P=0.0342，说明JCV感染与子宫肌瘤高度相关。高危型人乳头瘤病毒在子宫肌瘤、子宫颈癌、子宫内膜癌和卵巢上皮性癌患者中的检出率分别为19.4%、78.6%、20.0%和19.4%，子宫颈癌组中检出率明显高于其它组。单纯疱疹病毒2型、人类疱疹病毒4型及巨细胞病毒检出率几乎为0，进一步分析表明高危型人乳头瘤病毒与多瘤病毒不存在协同感染情况。
　　结论：多瘤病毒JCV感染与子宫肌瘤显著相关。高危型人乳头瘤病毒、单纯疱疹病毒2型、巨细胞病毒及人类疱疹病毒4型与多瘤病毒JCV和BKV间不存在协同感染情况。本研究为子宫肌瘤的发病机理提供了新的病原学可能。

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缩略词表

前言

课题设计

一、多瘤病毒分子检测方法的建立

二、多瘤病毒与妇科肿瘤的相关性研究

三、多瘤病毒感染与已知妇科肿瘤病毒协同感染可能性研究

四、伦理问题

多瘤病毒分子检测方法的建立

一、多瘤病毒检测现状分析

二、多瘤病毒核酸检测手段的确立

三、多瘤病毒JCV、BKV及SV40核酸检测样本的确立

多瘤病毒与妇科肿瘤的相关性研究

一、正常对照人群

二、子宫肌瘤、子宫颈癌、子宫内膜癌及卵巢上皮性癌患者临床资料、血样、尿样及活检样本采集

三、研究人群概况

四、多瘤病毒JCV及BKV在各人群中的检测

五、多瘤病毒JCV及BKV感染与妇科肿瘤关系的分析

多瘤病毒与已知妇科肿瘤病毒协同感染可能性研究

一、高危型HPV、HSV-2、CMV及EBV的核酸检测

二、高危型HPV、HSV-2、CMV及EBV检测结果分析

三、多瘤病毒与已知妇科肿瘤病毒协同感染可能性分析

分析与讨论

参考文献

附录

综述:致瘤病毒及多瘤病毒研究现状

参加科研工作和发表论文情况

致谢