催乳素和t-PA乳腺共表达载体构建和细胞表达研究

摘要

本研究从关中奶山羊中克隆得到催乳素基因，并以已有的人t-PA乳腺特异性表达载体pEBT为基础，成功的构建了催乳素和t-PA基因乳腺共表达载体pPT。转染鼠乳腺癌细胞EMT6，筛选获得阳性表达株。本实验验证了催乳素对提高外源蛋白的表达有促进作用并为利用体细胞核移植技术生产牛乳腺生物反应器，提供了高效的乳腺表达载体，对于提高乳腺生物反应器中外源蛋白表达量的研究进行了新的探索。相关研究结果如下： 1.通过RT-PCR技术成功的从关中奶山羊中克隆得到长度为760bp催乳素cDNA基因，其中包含完整的编码序列。序列分析表明，片段与GenBank中登录的羊PRLcDNA序列的同源性为99％，且突变不影响蛋白的结构和功能。 2.利用定向克隆的方法将PRLcDNA基因克隆至已有的人t-PA乳腺特异性表达载体pEBT，构建成催乳素和t-PA基因乳腺共表达载体pPT。载体含有抗性基因和绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因，并报告基因和目的基因表达为融合型表达。 3.通过脂质体法将表达载体pPT转染体外培养的小鼠乳腺癌细胞EMT6，经G418筛选，得到表达绿色荧光蛋白的阳性细胞。PCR检测表明，PRL基因已整合入阳性细胞染色体中。与转染pEBT的阳性细胞相比，转染pPT的细胞EGFP的表达量有所提高。

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文摘

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文献综述 第一章转基因动物乳腺生物反应器的研究进展

试验部分 第二章山羊催乳素基因cDNA的克隆及序列分析

试验部分 第三章催乳素和t-PA共表达载体的构建

试验部分 第四章催乳素和t-PA乳腺共表达载体在细胞中的表达初探

试验部分 第五章AS-PCR在异种核移植上的应用

总 结

参考文献

致谢

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