催乳素和外源基因乳腺共表达载体可提高外源基因在哺乳细胞的表达

摘要

为探讨应用牛催乳素促进乳腺生物反应器高效表达外源蛋白(如人乳铁蛋白、人血小板生成素)的可行性,构建两种牛催乳素和外源基因乳腺共表达载体.一种为牛催乳素基因和外源基因共用一个6.7 kb山羊β-酪蛋白启动子启动转录,两个基因以内部核糖体进入位点(IRES)连接;另一种为外源基因利用6.7 kb山羊β-酪蛋白启动子,催乳素基因利用2.0 kb山羊β-酪蛋白启动子,分别转录.脂质体转染后,RT-PCR以及ELISA分析结果证实外源基因的表达得到提高.在COS-7细胞(猴胚肾细胞),两种载体分别使乳铁蛋白的表达由12.6 μg/L提高到18.4 μg/L和37.2 μg/L(P<0.05);在HC-11细胞(小鼠乳腺上皮细胞),两种载体分别使乳铁蛋白的表达由13.7μg/L提高到20.7 μg/L和19.9 μg/L(P<0.05).利用双启动子载体,使人血小板生成素在COS-7细胞由572 ng/L提高到1340 ng/L(P<0.05);在HC-11细胞由783 ng/L提高1040 ng/L(P<0.05).结果证明催乳素可以有效的提高外源基因在哺乳类细胞的表达.