地衣芽孢杆菌可高效转录β-半乳糖苷酶基因强启动子的克隆、鉴定与分析

摘要

本文对地衣芽孢杆菌可高效转录β-半乳糖苷酶基因强启动子的克隆、鉴定进行了研究。主要内容如下： (1)筛选并直接应用了发酵液低温离心后的上清液样品与蛋白上样缓冲液以1：1比例混合的方法，再按照SDS-PAGE聚丙烯凝胶电泳规定的步骤对试验进行处理和操作，取得了较为满意的SDS-PAGE聚丙烯凝胶电泳图； (2)筛选出了转录活性强的启动子。构建出了地衣芽胞杆菌基因组的部分基因组文库，并成功的运用鸟枪打靶的方法应用启动子探针载体克隆出了一批具有强转录活性的启动子； (3)通过对强启动子pB9核酸序列组成进行测定并与地衣芽孢杆菌基因组DNA序列进行了对比，表明强启动子pB9来源于地衣芽孢杆菌LuxS基因，为来源正确的启动子； (4)应用启动子预测软件预测与分析，找到了其功能元件的位置，表明pB9具有典型的原核生物启动子结构。

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第一章文献综述

1.1启动子概述

1.1.1启动子的结构

1.1.2启动子的类型

1.1.3启动子克隆的方法

1.2启动子在动物繁殖中的应用

1.2.1启动子在生殖生理调控中的应用

1.2.2启动子在泌乳生理中的应用

1.2.3启动子在生殖免疫中的应用

1.3国内外研究概况

1.4本研究目的和意义

第二章试验研究

2.1引言

2.2材料与方法

2.2.1材料

2.2.2方法

2.3结果与分析

2.3.1启动子的克隆

2.3.2强启动子的鉴定

2.4讨论

2.4.1地衣芽胞杆菌菌株部分基因组文库的构建

2.4.2基因文库的筛选

2.4.3阳性克隆子的酶切分析

2.4.4 β-半乳糖苷酶酶活的测定

2.4.5 SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳

2.4.6本试验中一个意外发现

2.5结论

2.5.1筛选出了转录活性强的启动子

2.5.2PB9为正确来源于地衣芽孢杆菌的启动子

2.5.3 pB9具有典型的原核生物启动子的结构特征

参考文献

致谢

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