核桃粕多肽提取分离及功能特性研究

摘要

核桃具有很高的营养价值和药用价值，是开发高级保健食品的良好原料。本论文用不同蛋白酶酶解核桃粕蛋白，测定了酶解产物的特性、抗氧化性及体外ACE抑制功能，采用Sephadex G-25对蛋白酶酶解产物进行了分离，测定了不同分子片段多肽的功能特性。取得以下结果： 木瓜蛋白酶酶解核桃粕蛋白质最佳的酶解条件为酶解温度为65℃，pH为6.5，底物浓度为3％，加酶量(E/S)为7000 u/g，用超声波功率750w的60％预处理12min。碱性蛋白酶酶解核桃粕蛋白质的最佳的酶解条件为酶解温度为55℃，pH为8，底物浓度为3％，加酶量(E/S)为4000 u/g，用超声波功率750w的50％预处理9min。 在最佳酶解条件下木瓜蛋白酶酶解核桃粕蛋白180min，酶解液的乳化能力和乳化稳定性分别为140.7和20.8最高值；木瓜蛋白酶酶解产物中5733～1321Da片段的多肽其乳化性能和乳化稳定性最好，分别为165.6、19.5。 碱性蛋白酶酶解核桃粕蛋白，在最佳酶解条件下酶解120min时酶解液的乳化能力最大为157.6，150min时乳化稳定性最高为21.8。碱性蛋白酶酶解产物中5733～1321Da的多肽乳化能力最高值为165.6， 12384～5733Da的多肽乳化稳定性最好为19.7。 在最佳的酶解条件下木瓜蛋白酶酶解核桃粕蛋白210min，酶解液的抗氧化活性较高，其中OH·清除率为55.43％，02-·清除率为64.23％，DPPH·清除率79.32％，总抗氧化能力98.74单位/ml。分子量在1321～607Da片段的多肽其抗氧化性较好，0H·清除率为42.26％，02-·清除率57.33％，DPPH·清除率为74.43％，总抗氧化能力88.43单位/ml。 在最佳酶解条件下，碱性蛋白酶酶解核桃粕酶解210min的酶解液的OH·清除率为72.3％；总的抗氧化能力为171.579单位/ml；02-·清除能力为83.1％，DPPH·清除能力为102.6％。抗氧化性多肽主要集中在1321～612Da之间，占整个多肽含量的13.22％；02-·清除率为62.57％，OH·清除率为70.23％、DPPH·清除率为99.56％，总抗氧化能力为118.987单位/ml。 浓度为300mmol/L的NaCl和100mmol/L硼酸盐缓冲体系对ACE活性保护最好。通过响应面分析得出木瓜蛋白酶最佳的酶解条件为温度60℃，pH为7.5，底物浓度为3％；加酶量(E/S)为6000 u/g，酶解时间为240min，酶解液对ACE抑制较好；其分子量分布在612—307Da的多肽ACE抑制率最大为93.56％，该片断占整个酶解液多肽片段的9.81％，总的游离氨基酸含量占该多肽片段含量的8.431％，含量最高的氨基酸为亮氨酸(Leu)。碱性蛋白酶解的最佳条件为温度40℃，pH为8.5，底物浓度为3％，加酶量(E/S)为5000 u/g，酶解时间为150min，酶解液对ACE抑制较好；其分子量分布在1321-612Da多肽ACE抑制率最大为93.27％，该片断占整个酶解液多肽片段的15.12％，总的游离氨基酸含量占该多肽片段含量的O.062％，含量最高的氨基酸为脯氨酸(Pro)。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章文献综述

1.1核桃概述

1.2生物活性肽及其发展历史

1.2.1生物活性肽及其分类

1.2.2活性肽的研究历史

1.3活性肽的生产方法

1.3.1天然活性肽的分离提取

1.3.2化学合成法

1.3.3基因重组法制取活性肽

1.3.4食品蛋白质水解制取活性肽

1.4生物活性肽的生理活性及其研究现状

1.4.1活性肽的吸收

1.4.2抗氧化活性肽

1.4.3降血压肽

1.4.4其他生物活性肽及其研究进展

1.5生物活性肽的分离纯化、分析方法研究进展

1.5.1超滤

1.5.2色谱

1.6本论文研究的意义和内容

1.6.1研究的目的和意义

1.6.2研究的内容

第二章核桃蛋白的酶解技术研究

2.1材料与方法

2.1.1材料

2.1.2方法

2.2结果与分析

2.2.1核桃粕与核桃蛋白质成分测定

2.2.2核桃蛋白酶解用蛋白酶的确定

2.2.3不同单因素条件对木瓜蛋白酶酶解反应的影响

2.2.4木瓜蛋白酶酶解核桃粕蛋白条件优化研究

2.2.5超声波预处理对木瓜蛋白酶酶解核桃粕效果的影响

2.2.6不同单因素条件对碱性蛋白酶酶解反应的影响

2.2.7碱性蛋白酶酶解核桃粕蛋白条件优化的研究

2.2.8超声波预处理对碱性蛋白酶酶解核桃粕效果的影响

2.3 小结

第三章核桃粕酶解产物理化特性的研究

3.1材料与方法

3.1.1材料

3.1.2方法

3.2结果与分析

3.2.1标准曲线制作

3.2.2核桃多肽的感官性质和成分分析

3.2.3吸湿性

3.2.4核桃粕蛋白酶解产物特性随酶解时间的变化

3.2.5金属离子对核桃粕蛋白酶解产物稳定性的影响

3.2.6酶解产物在不同酶解时间下的Sephadex G-25色谱分析

3.2.7最佳酶解工艺下不同分子片断的分布及其乳化性能的测定

3.3 小结

第四章核桃粕酶解产物抗氧化性质的研究

4.1材料与方法

4.1.1材料

4.1.2方法

4.2结果与分析

4.2.1酶解产物抗氧化性随酶解时间的变化

4.2.2最佳酶解工艺下酶解物不同分子量片段多肽的活性检测

4.3小结

第五章核桃粕蛋白ACE抑制肽功能特性研究

5.1材料与方法

5.1.1材料

5.1.2方法

5.2结果与分析

5.2.1不同浓度和种类的缓冲液对ACE活性的影响

5.2.2盐浓度对ACE活性的影响

5.2.3木瓜蛋白酶酶解条件对ACE抑制率的影响

5.2.4木瓜蛋白酶酶解产物抑制ACE活性分析

5.2.5碱性蛋白酶酶解的各因素对ACE抑制率的条件优化研究

5.2.6碱性蛋白酶酶解产物的抑制ACE活性分析

5.3小结

第六章结论、创新点与展望

参考文献

致谢

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