变性葵粕分离蛋白的提取及功能多肽的研究

摘要

本文以变性葵粕为实验对象，研究变性葵粕蛋白的不同提取工艺和小分子多肽的生物酶水解技术，同时，通过SDS-PAGE凝胶电泳技术分析葵粕蛋白与多肽的分子质量分布情况;通过动物实验研究葵粕多肽的皮肤保湿及抗光老化功能。结果表明:
　　1、首先以高温变性的葵粕为原料，采用正交实验方法确定传统的碱溶酸沉(JR)工艺和盐提(YT)工艺制备葵粕分离蛋白的最佳提取条件。前者的最佳提取条件为:料液比为1∶14，提取温度为55℃，pH为8.0;后者的最佳提取条件为:料液比为1∶10，提取温度为55℃，pH为7.5。
　　2、重点研究了盐提工艺提取的葵粕分离蛋白的结构及物理特性，结果表明:葵粕分离蛋白主要是以α-螺旋结构为主，相对分子质量主要集中在50-14KDa之间;氨基酸种类齐全，比例平衡，富含人体所需的8种必需氨基酸，其含量为26.3％，EAAI(必需氨基酸指数)为0.87，尽管赖氨酸为第一限制性氨基酸，但葵粕蛋白仍是较优质的植物蛋白资源。
　　3、通过蛋白酶筛选及单因素试验，确定采用2709碱性蛋白酶和酸性蛋白酶两步水解的工艺制备葵粕多肽。最佳工艺条件下制备的多肽经过Tricine-SDS-PAGE电泳及凝胶层析法分析表明:碱性蛋白酶一步水解后，分子质量在6200-15000Da之间的多肽占有较大的比例，而分子质量低于3400Da的小分子比例较少;经过胃蛋白酶第二步水解并超滤后，6500-1355Da的多肽分子量占到45.41％，低于1355Da的多肽达到52.17％，而6500Da以上的多肽只有2.42％，达到了功能性多肽样品的要求。
　　4、皮肤保湿试验发现，浓度为3％的多肽溶液具有较好的保湿作用。在光老化小鼠的皮肤上涂抹800mg/kg·bw·d葵粕多肽，可显著增加皮肤组织中MDA和HYP的含量(p＜0.05)，表明葵粕多肽对紫外线引起的皮肤光老化具有显著的保护作用，与Vc的抗光老化作用处于同一水平，为葵粕多肽在化妆品和保健品领域的应用提供了理论依据。

目录

摘要

第一章 绪论

1．1 向日葵的分布及用途

1．2 葵花籽组成、营养特性及应用价值

1．3 葵花籽饼粕的工艺来源

1．4 用植物蛋白制备功能性多肽的研究进展

1．4．1 植物蛋白的制备方法

1．4．2 植物多肽的制备方法

1．5 植物活性肽的功能机理及应用前景

1．5．1 多肽吸收机制

1．5．2 功能多肽的应用前景

1．6 多肽抗皮肤衰老的研究

1．6．1 皮肤衰老机理

1．6．2 延缓皮肤衰老的措施

1．7 葵花蛋白与多肽的研究现状

1．7．1 葵花饼粕的研究现状

1．7．2 葵粕多肽的研究现状

1．8 本论文研究的主要研究内容及意义

1．8．1 主要研究内容

1．8．2 实验工艺路线

1．8．3 本论文研究意义

第二章 葵粕分离蛋白的制备

2．1 实验材料

2．2 试验方法

2．2．1 测定方法

2．2．2 葵粕分离蛋白的不同提取工艺

2．3 结果与讨论

2．3．1 变性葵粕成分测定结果

2．3．2 两种提取工艺的最佳提取条件的确定

2．3．3 两种工艺提取的分离蛋白比较

2．3．4 FT-IR光谱分析

2．3．5 不同工艺葵粕分离蛋白电泳分析结果

2．3．6 氨基酸组成分析

2．4 本章小结

第三章 葵粕多肽的制备

3．1 实验材料

3．2 试验方法

3．2．1 测定方法

3．2．2 用葵粕分离蛋白制备多肽的试验

3．2．3 酶解条件的选择

3．2．4 蛋白水解液的超滤分离

3．2．5 数据处理和函数分析

3．3 结果与讨论

3．3．1 蛋白酶活力测定结果

3．3．2 水解葵粕分离蛋白的酶及组合的确定

3．3．3 碱性蛋白酶最佳水解条件的研究

3．3．4 胃蛋白酶二次水解最佳条件的研究

3．4 超滤后多肽分子质量分布

3．5 葵粕多肽理化指标的测定结果

3．6 本章小结

第四章 葵粕多肽保健功能的研究

4．1 试验材料及仪器

4．2 保湿试验方法

4．2．1 实验动物分组

4．2．2 试验样品配制

4．2．3 试验给药方法

4．2．4 皮肤水分的测定

4．2．5 统计分析

4．3 抗皮肤光老化试验

4．3．1 实验动物分组

4．3．2 试验样品的制备

4．3．3 光老化模型的建立

4．3．4 实验给药方法

4．3．5 取材方法

4．3．6 皮肤组织中蛋白含量测定

4．3．7 皮肤组织中丙二醛(MDA)含量的测定

4．3．8 皮肤组织中羟脯氨酸(HYP)含量的测定

4．4 统计分析

4．5 结果与讨论

4．5．1 保湿试验结果

4．5．2 紫外线照射老鼠的皮肤组织形态变化

4．5．3 光老化小鼠相同皮肤重量的变化

4．5．4 光老化小鼠皮肤组织MDA含量的分析

4．5．5 光老化小鼠皮肤组织HYP及胶原蛋白含量的分析

4．6 本章小结

参考文献

发表论文

参与科研情况

个人简况

致谢

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