乳酸菌对寄生曲霉生长的抑制及其毒素降解的研究

摘要

黄曲霉毒素是现今发现的毒性和致癌性最强的天然污染物。黄曲霉毒素可造成猪、鸡、鸭、火鸡、羊、牛等多种动物的急慢性中毒，使畜禽生产性能下降，抵抗力降低，甚至死亡，并可在畜产品中残留，危害人体健康。本文在乳酸菌对寄生曲霉生长的抑制及其毒素的生物降解方面进行了研究。本试验包括三部分。
　　 试验一乳酸菌对寄生曲霉生长的抑制作用及其影响因素
　　 将乳酸菌与寄生曲霉孢子同时接种于MRS培养液中37℃培养，每隔6h取样，直至30h，28℃隔水式恒温培养箱培养，72h后进行霉菌孢子萌发计数;每隔3d取样，直至12d，进行AFB1的测定。设置不同温度、酸碱度和乳酸菌浓度研究乳酸菌抑制寄生曲霉生长的影响因素。结果显示植物乳酸杆菌组和保加利亚乳酸杆菌组30h时寄生霉菌孢子没有萌发，3-12d内未检测到AFB1，而对照组寄生霉菌孢子萌发且检测到AFB1。37℃，pH6.8，乳酸菌初始浓度为107CFU/ml时乳酸菌对寄生曲霉生长的抑制作用最强。结果说明植物乳酸杆菌和保加利亚乳酸杆菌在MRS液体培养基中可抑制寄生曲霉的生长且乳酸菌对寄生曲霉生长的抑制作用与温度、酸碱度和乳酸菌浓度有关。
　　 试验二乳酸菌对黄曲霉毒素B1的降解作用及其影响因素
　　 分别将不同的乳酸菌培养液放入冷冻离心机4℃10000r/min离心。弃去上清液，向沉淀的乳酸菌细胞中加入灭菌的生理盐水，轻轻吹打悬浮，加入10μlAFB1。将混有AFB1的乳酸菌细胞悬液在37℃，180r/min振荡条件下培养120min。冷冻离心机4℃以10000r/min离心10min，取出上清液，并向沉淀中加入10ml生理盐水并重复离心2次，合并上清液，按ELISA法测定离心所得上清液中AFB1的量。设置不同温度、作用时间、乳酸菌浓度和乳酸菌活性研究乳酸菌对黄曲霉毒素B1吸附作用的影响因素。结果显示植物乳酸杆菌、保加利亚乳酸杆菌、干酪乳杆菌干酪亚种和鼠李糖乳酸杆菌对AFB1均有不同程度的吸附作用，其中鼠李糖乳杆菌的吸附率最高达64.8％。乳酸菌对AFB1的吸附作用与温度、作用时间、乳酸菌活性无关;而与乳酸菌的浓度有关，浓度越高，乳酸菌的吸附作用越强。
　　 试验三乳酸菌对饲料中寄生曲霉生长抑制作用的研究
　　 鸡饲料进行高压灭菌，将寄生曲霉孢子悬液和乳酸菌培养液均匀喷洒于饲料中发酵10d保持含水量在20％左右，同时维持培养基中正常的含氧量。试验结束后将发酵过的饲料分装到袋中，经高压灭菌后晒干、混合，最后密封保存待测。结果显示加入植物乳酸杆菌的饲料未见寄生曲霉孢子萌发且没检测到AFB1，而加入保加利亚乳酸杆菌和对照组的饲料寄生曲霉孢子萌发且检测到AFB1。结果表明植物乳酸杆菌可抑制饲料中寄生曲霉生长和产毒，而保加利亚乳酸杆菌对饲料中的寄生曲霉生长几乎没有抑制作用。

目录

摘要

英文缩写词表

文献综述

1 前言

2 产生黄曲霉毒素菌群的接种和无性繁殖

2．1 产黄曲霉毒素真菌的种类和接种源

2．2 影响黄曲霉菌群接种和繁殖的因素

3 黄曲霉毒素的性质和毒性作用

3．1 黄曲霉毒素的化学结构和理化特性

3．2 黄曲霉毒素的毒性作用

4 饲料霉菌毒素的脱毒方法

4．1 机械脱毒

4．2 物理脱毒

4．3 化学脱毒

4．4 酶制剂脱毒

4．5 营养解毒法

5 黄曲霉毒素的检测方法

5．1 薄层色谱法(TLC法)

5．2 免疫化学

5．3 高效液相色谱法(HPLC)

5．4 微柱筛选法

6 研究目的与意义

试验一 乳酸菌对寄生曲霉生长的抑制作用及其影响因素

1 试验材料

1．1 培养基

1．2 菌种

1．3 试剂

1．4 仪器

2 方法

2．1 寄生曲霉孢子悬液的制备

2．2 植物乳酸杆菌活化培养和活菌计数

2．3 保加利亚乳酸杆菌的分离培养和活菌计数

2．4 植物乳酸杆菌和保加利亚乳酸杆菌对寄生曲霉孢子活性的影响

2．5 植物乳酸杆菌和保加利亚乳酸杆菌抑制寄生曲霉产毒

2．6 温度对乳酸菌抑制寄生曲霉孢子活性的影响

2．7 pH对乳酸菌抑制寄生曲霉孢子活性的影响

2．8 乳酸菌的初始浓度对乳酸菌抑制寄生曲霉孢子活性的影响

2．9 数据处理

3 结果

3．1 试验组不同时间寄生曲霉孢子的活性

3．2 试验组不同时间AFB1的含量

3．3 温度对乳酸菌抑制寄生曲霉孢子活性影响

3．4 pH对乳酸菌抑制寄生曲霉孢子活性的影响

3．5 浓度对乳酸菌抑制寄生曲霉孢子活性的影响

4 讨论

试验二 乳酸菌对黄曲霉毒素B1的降解作用及影响因素

1 试验材料

1．1 培养基

1．2 菌种

1．3 试剂

1．4 仪器

2 方法

2．1 菌种的恢复培养

2．2 乳酸菌的活菌计数(细菌平板计数法)

2．3 乳酸菌对AFB1的吸附作用

2．4 时间对乳酸菌吸附AFB1的影响

2．5 温度对乳酸菌吸附AFB1的影响

2．6 乳酸菌有无活性对吸附AFB1的影响

2．7 乳酸菌的浓度对乳酸菌吸附AFB1的影响

2．8 ELISA法测定AFB1的含量

2．9 数据分析

3 结果

3．1 乳酸菌对AFB1的吸附强度

3．2 时间对乳酸菌吸附AFB1的影响

3．3 温度对乳酸菌吸附AFB1的影响

3．4 乳酸菌活性对乳酸菌吸附AFB1的影响

3．5 浓度对乳酸菌吸附AFB1的影响

4 讨论

试验三 乳酸菌对饲料中寄生曲霉生长和产毒影响的研究

1 试验材料

1．1 培养基

1．2 菌种

1．3 试剂

1．4 主要仪器

2 方法

2．1 寄生曲霉孢子悬液的制备

2．2 发酵试验

2．3 AFB1的提取

2．4 ELISA法测定AFB1的含量

3 结果

3．1 10d不同试验组发酵的情况

3．2 不同试验组AFB1的含量

4 讨论

结论

参考文献

附录

致谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文

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