四角蛤蜊中重金属、孔雀石绿及其代谢物的检测研究

摘要

近年来海洋中重金属超标问题以及兽药残留问题已经越来越受到人们关注。本实验分别对四角蛤蜊中重金属铅、镉、汞、砷以及兽药孔雀石绿、结晶紫及其代谢物进行了研究。研究内容包括以下几方面:
　　 通过随机取样,研究了重金属检测前处理中微波消解的条件,考察了不同消解液、不同消解方法、消解温度、消解时间、消解功率等因素对样品消解效果的影响。研究结果表明:上述各因素都会对样品消解效果产生一定的影响,通过试验最终确定了消解的最佳条件:采用微波消解,消解液为HNO3∶ H2O2=6∶2,消解最高温度为195℃,采用梯度升温,消解时间为15min,消解的最初起始功率为400W。
　　 考察了汞、砷元素测定时的氢化物发生-原子荧光光谱法的仪器条件,即光电倍增管负高压、灯电流、原子化器高度、载气及屏蔽气流量、硼氢化钾浓度、载液浓度和砷的还原剂等因素对荧光强度的影响。选定了样品测定的最佳测定条件,研究结果表明:在汞的负高压为270V,砷负高压为280V,汞的灯电流为25mA,砷的灯电流为50mA,汞的原子化器高度为10mm,砷的原子化器高度为8mm,载气为400mL/min,屏蔽气流量为900ML/min,汞的硼氢化钾浓度为0.5％,砷的硼氢化钾浓度为2％,载液盐酸的体积分数为20％,采用硫脲(10％)和抗坏血酸(5％)作为砷的预还原剂。汞的线性范围为0～5μg/kg,检出限为0.31μg/kg,砷的线性范围为0～50μg/kg,检出限为0.27μg/kg,重现性实验和回收率实验表明方法精密度及准确度良好。
　　 考察了铅、镉元素测定时的石墨炉原子吸收装置的仪器条件,包括石墨炉干燥、灰化、原子化、清除阶段的设置,狭缝宽度的确定,石墨管的选择,基体改进剂的选择。研究结果表明:选用平台石墨管进行加热,采用梯度升温方式,干燥温度为150℃,时间为20s,铅的灰化温度为800℃,镉灰化温度为500℃,时间为10s,铅的原子化温度为2400℃,镉原子化温度为2200℃,时间为3s,铅清除温度为2500℃,镉清除温度为2400℃,时间为2s。狭缝宽度为1.0。确定了以0.1g/L的硝酸钯为基体改进剂。铅的线性范围为0～30μ g/kg,检出限为0.248μg/kg,镉的线性范围为0～2μg/kg,检出限为0.0361μg/kg,重现性实验和回收率实验表明方法精密度及准确度良好。
　　 考察了采用UPLC/MS/MS对蛤蜊中孔雀石绿、结晶紫及其代谢物的检测。优化了前处理方法,仪器条件。结果表明:选择乙腈作为提取溶剂,采用先匀浆再混合再超声的综合提取方法,超声温度为70℃,超声时间为15min,先用10％的氯化钠和二氯甲烷除去水溶性杂质,再过中性氧化铝小柱去除脂溶性等杂质最后旋转蒸干过0.2μm的有机相滤膜,上机测定。仪器采用BEH C18柱,A缓冲盐溶液（5mmol/L乙酸铵水溶液、0.1％的甲酸）、B乙腈（0.1％的甲酸）的流动相,正离子电离(ESI+),以母离子和响应值高的子离子进行定量。孔雀石绿、结晶紫及其代谢物的线性范围为0.5～10μg/kg,各种化合物检出限为MG:0.98μg/kg、LMG:0.93μg/kg、CV:0.86μg/kg、LCV:0.92μg/kg、LMG-D6:0.88μg/kg,重现性实验和回收率实验表明方法精密度及准确度良好。
　　 最后测定了实际样品蛤蜊中的重金属含量及兽药残留量并对结果进行了讨论,根据试验结果对本研究的进一步拓展提出了展望。

目录

摘要

符号和缩略词说明

1 绪论

1．1 四角蛤蜊概况

1．2 海洋中重金属的污染

1．3 孔雀石绿、结晶紫及其代谢物

1．4 研究内容

2 四角蛤蜊中汞、砷的检测

2．1 实验仪器和设备

2．2 试剂和标准溶液的配制

2．3 实验材料的制备和保存

2．4 器皿处理

2．5 实验部分

2．5．1 称样

2．5．2 样品前处理

2．6 AFS-3100条件

2．7 结果与讨论

2．7．1 微波消解条件的优化

2．7．2 原子荧光仪器条件的优化

2．7．3 反应体系条件的优化

2．7．4 标准曲线的制备

2．7．5 方法的检出限

2．7．6 方法精密度和准确性

2．7．7 样品分析及回收率

2．8 小结

3 四角蛤蜊中铅、镉的检测

3．1 实验仪器和设备

3．2 试剂和标准溶液的配制

3．2．1 试剂和材料

3．2．2 标准品的配制

3．3 实验材料的制备和保存

3．4 器皿处理

3．5 实验部分

3．5．1 称样

3．5．2 样品前处理

3．6 AA-6800仪器条件

3．7 结果与讨论

3．7．1 微波消解条件的优化

3．7．2 仪器条件的优化

3．7．3 反应体系条件的优化

3．7．4 标准曲线的制备

3．7．5 方法检出限

3．7．6 方法精密度和准确性

3．7．7 样品分析及回收率

3．8 小结

4 四角蛤蜊中孔雀石绿、结晶紫及其代谢物的检测

4．1 实验仪器和设备

4．2 试剂和标准溶液的配制

4．2．1 试剂和材料

4．2．2 试剂的配制

4．2．3 标准品的配制

4．3 实验材料的制备和保存

4．4 实验部分

4．4．1 称样

4．4．2 提取

4．4．3 净化

4．4．4 浓缩

4．4．5 再净化

4．5 UPLC-MS／MS条件

4．5．1 液相色谱分析条件

4．5．2 质谱分析条件

4．6 结果与讨论

4．6．1 UPLC／MS／MS条件的优化

4．6．2 质谱条件的优化

4．7 样品前处理的优化

4．7．1 提取溶剂的选择

4．7．2 提取方法的选择

4．7．3 净化方法的选择

4．7．4 浓缩方法的选择

4．7．5 滤膜的选择

4．8 方法学验证

4．8．1 线性范围、相关系数

4．8．2 仪器检出限

4．8．3 准确度与精密度试验

4．8．4 实际样品中药物残留的检测

4．8．5 结论

5 小结与展望

5．1 小结

5．1．1 汞、砷的检测

5．1．2 铅、镉的检测

5．1．3 孔雀石绿、结晶紫及其代谢物的检测

5．2 展望

参考文献

致谢

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