缺氧诱导肝纤维化动物模型的建立

摘要

原发性肝癌(Primary liver carcinoma,PLC)是严重危害人类健康的常见恶性肿瘤之一,全球每年新增约60万肝癌患者,我国肝癌年发病人数约35万,有30万人死于此病,发病率和死亡率均占恶性肿瘤第二位。目前,肝切除术、肝移植等根治性外科治疗仍是肝癌首选治疗方法。但是肝癌发病隐匿,早期患者可能没有任何症状,将近70％的患者就诊时已属中晚期,失去了手术的机会。经导管动脉化疗栓塞术(Transcatheter arterial chemoembolization, TACE)被公认为是不能手术切除肝癌的首选治疗方法,该治疗能够阻断肝癌供血的靶动脉,导致肝癌组织缺血坏死。患者治疗后临床病情明显改善,肿瘤体积缩小,症状缓解或消失。介入栓塞治疗降低了肝癌组织的血管侵袭及转移的几率,部分病人可重新获得手术切除机会。但是,临床观察发现,介入栓塞治疗或多或少都会影响患者的肝脏功能,特别是反复介入栓塞后,大部分伴有肝硬化的肝癌患者出现肝纤维化程度进行性加重,肝功能持续下降,严重影响了肝癌介入栓塞治疗的远期疗效及患者生存期。以往研究认为,肝纤维化是各种原因引起的慢性肝损伤所共有的病理改变,介入栓塞治疗后化疗药物、炎症、组织缺血、缺氧以及治疗后可能出现的机体免疫机能变化、细胞因子调控失常,均可从不同的环节启动肝纤维化过程,并最终加重肝纤维化。栓塞所致的组织缺氧是导致肝癌组织坏死的主要原因,也可能是加重肝纤维化重要的因素之一。因此,本研究拟建立一种肝脏组织缺氧导致的肝纤维化动物模型,用于介入治疗后缺氧导致肝纤维化机制的研究,并且研究这一过程中可能的关键分子,为介入栓塞后肝纤维化的治疗提供理论依据。本研究分两个部分:
　　第一部分肝固有动脉结扎术建立大鼠肝脏缺氧模型
　　目的:利用肝动脉结扎术(Hepatic arterial ligation,HAL)的手术方法,建立大鼠肝脏缺氧模型。
　　方法:健康成年Sprague Dawley(SD)大鼠8只,随机抽取3只进行解剖,了解实验动物肝脏位置、大小、分叶情况,确定腹腔血管走行及分支情况,掌握肝门部管道的位置关系及解剖分离技术。另外5只大鼠麻醉后行开腹手术,分离暴露肝门部,结扎其肝固有动脉造成肝脏缺氧,缝合腹壁。观察手术后大鼠基本生命体征变化和存活情况。
　　结果:通过对3只实验动物的解剖观察,熟悉了大鼠肝脏及腹腔血管的解剖位置。对5只大鼠进行肝固有动脉结扎术,1只动物由于术中误伤肝门静脉导致大出血死亡,其余动物手术顺利,术后全部存活,生命体征平稳。
　　结论:大鼠肝固有动脉结扎术手术成功率高,适合用于建立肝脏缺氧的动物模型。
　　第二部分肝脏缺氧诱导的大鼠肝纤维化
　　目的:利用肝脏缺氧模型,观察手术后大鼠肝脏病理改变,初步分析缺氧诱导肝纤维化形成过程中起关键作用的分子。
　　方法:10只SD大鼠,随机分为缺氧组和对照组,每组5只,缺氧组行肝固有动脉结扎术,对照组手术开腹分离至肝门部后即缝合腹壁。14天后处死实验动物取出肝脏,福尔马林固定后石蜡包埋切片,行苏木精-伊红(Hematoxylin– Eosin,HE)染色观察组织病理改变,并进行天狼星红-苦味酸染色观察胶原增生情况。免疫组织化学染色(Immunohistochemistry,IHC)观察缺氧诱导因子1α(Hypoxia inducible factor1α,Hif-1α)表达。
　　结果:缺氧组大鼠肝细胞坏死、增生,胶原纤维生成,Hif-1α表达显著升高,与对照组比较具有显著差异。
　　结论:肝固有动脉结扎缺氧能够诱导大鼠肝脏纤维化形成,Hif-α在肝纤维化组织中表达升高,有可能参与了这一病理变化过程。

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缩略语表

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文献回顾

正文

第一部分 肝固有动脉结扎术建立大鼠肝脏缺氧模型

1. 材料

2. 方法

3. 结果

4. 讨论

第二部分 肝脏缺氧诱导的大鼠肝纤维化

1. 材料

2. 方法

3. 结果

4. 讨论

小结

参考文献