酪氨酸激酶受体DDR2在小鼠肾间质纤维化进展中作用的研究

摘要

【背景】
　　流行病学调查显示，全球成年人慢性肾病的患病率高达10％以上，并且其中大约1％的慢性肾病患者发展成终末期肾病。不仅严重影响患者的生活质量，而且消耗大量医疗资源。肾间质纤维化是慢性肾病进展至终末期肾病的共同通路，与肾功能的关系非常密切。肾间质纤维化主要病理特点是肾间质聚集大量的细胞外基质，尤其是胶原蛋白。国内外文献报道：DDRs在心肌纤维化，肺纤维化等器官纤维化中起着重要的作用，抑制DDRs的表达可显著缓解纤维化的程度，然而大部分的文献都是关于DDR1的报道，关于DDR2的报道很少，尤其是关于DDR2与肾纤维化的研究目前未见报道。DDR2主要介导细胞与细胞外基质之间的信号传递，DDR2可与胶原结合进而被激活，并且DDR2高表达于小鼠肾组织，因此我们推测DDR2在肾间质纤维化的发生发展中可能发挥重要作。治疗肾间质纤维化目前尚无理想的药物。羟苯磺酸钙在临床上主要用于改善微循环，而肾间质纤维化的病理特征为正常肾间质和肾小管结构被大量聚集的细胞外基质所代替，影响肾组织微循环，并影响肾功能。因此，我们推测羟苯磺酸钙可能对肾间质纤维具有一定的治疗作用，并进行了相关的实验设计与研究。
　　【目的】
　　1.建立小鼠肾间质纤维化模型。
　　2.探究DDR2在小鼠肾间质纤维化进程中发挥的作用。
　　3.研究羟苯磺酸钙干预对小鼠肾脏 DDR2表达的影响以及对小鼠肾间质纤维化的影响。
　　【方法】
　　1.采用单侧输尿管结扎模型和单侧肾脏缺血再灌注模型制备 C57小鼠肾间质纤维化模型，在建模后不同时间点获取肾脏组织，采用Masson、HE染色、Realtime PCR、羟脯氨酸含量测定技术，观察小鼠肾脏的组织形态以及纤维化相关分子 COL1A1、Fibronectin、α-SMA的表达变化。
　　2.以 DDR2野生型小鼠为对照组，DDR2纯合小鼠为实验组，采用单侧输尿管结扎制备小鼠肾间质纤维化模型，应用Masson、HE染色、Realtime PCR、羟脯氨酸含量测定等技术，观察单侧输尿管结扎术后不同时间点小鼠肾脏的组织形态，DDR2以及纤维化相关分子COL1A1、Fibronectin、α-SMA的表达变化。
　　3.将C57小鼠随机分为假手术组（Sham组）、肾间质纤维化模型组（UUO组）及羟苯磺酸钙治疗组（CDT组）；采用单侧输尿管结扎制备小鼠肾间质纤维化模型，CDT组给予羟苯磺酸钙灌胃、Sham组和UUO组给予双蒸水灌胃，采用HE、Masson染色、免疫组化、蛋白免疫印迹以及Realtime PCR观察单侧输尿管结扎术后14天小鼠术侧肾脏DDR2表达以及肾纤维化程度。
　　【结果】
　　1.HE染色结果：建模后小鼠肾脏肾小管结构破坏严重，肾间质大量炎症细胞浸润；Masson染色结果：建模后肾间质蓝染胶原显著增多；Realtime PCR结果：建模后小鼠肾组织纤维化相关分子COL1A1、Fibronectin、α-SMA表达量较显著上调；羟脯氨酸含量测定结果：建模后肾组织羟脯氨酸含量显著增多，并且呈现逐渐升高趋势。2.HE染色结果：DDR2纯合型小鼠与野生型小鼠相比，肾间质炎症细胞浸润明显减少；Masson染色结果：DDR2纯合型小鼠与野生型小鼠相比，肾间质蓝染胶原纤维明显减少；Realtime PCR结果：野生型小鼠UUO和IRI术后0，7，14天肾组织DDR2基因相对表达量呈逐渐升高趋势；UUO术后14天肾组织的纤维化相关 COL1A1， Fibronectin和α-SMA分子基因相对表达量：DDR2纯合型小鼠肾组织均比野生型小鼠肾组织显著降低；羟脯氨酸含量测定结果：UUO术后14天小鼠肾脏羟脯氨酸含量，DDR2纯合型小鼠比野生型小鼠显著减少。
　　3.HE染色结果：CDT组较UUO组病理改变显著减轻，有不同程度的肾小管上皮细胞肿胀、空泡变性；Masson染色结果：CDT组肾间质蓝染胶原纤维较UUO组显著减轻；免疫组化结果：CDT组较UUO组肾间质COL1A1表达明显降低；免疫印迹结果：CDT组纤维化相关COL1A1蛋白表达量较UUO组明显减少。
　　【结论】
　　1.单侧输尿管结扎和单侧肾脏缺血再灌注模型可以诱导小鼠肾间质纤维化。
　　2.DDR2在小鼠肾间质纤维化进展中表达量逐渐升高，DDR2纯合型小鼠肾间质纤维化较野生型小鼠显著减轻。
　　3.羟苯磺酸钙可以影响小鼠肾间质 DDR2表达，减轻单侧输尿管结扎小鼠肾间质纤维化。

目录

声明

缩略语表

前言

文献回顾

第一部分 肾纤维化研究进展

第二部分 DDRs信号通路研究进展

第一部分 实验模型

1.实验材料

2.实验方法

3.实验结果

4.讨论

第二部分 DDR2在小鼠肾间质纤维化进展中的作用

1.实验材料

2.实验方法

3.实验结果

4.讨论

第三部分 羟苯磺酸钙干预对小鼠肾间质纤维化的影响

1.实验材料

2.实验方法

3.实验结果

4.讨论

小结

参考文献

个人简历和研究成果

致谢